菟丝子多糖提取工艺优化及其对脂质过氧化的影响(一)

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作者：张丽娟，张宜欣，古同男，周秀艳

【摘要】 　　目的 优选菟丝子多糖提取的最佳工艺并探讨菟丝子多糖在应激状态下对小鼠脑组织脂质过氧化物反应的影响。方法采用正交实验设计方法优选最佳工艺；比色法测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果影响菟丝子多糖提取率的主要因素为提取温度与料液比；不同剂量的菟丝子多糖均能降低MDA 的含量( P 0. 05) ,并能增加SOD 的活性(P 0. 05)。结论菟丝子多糖最佳提取工艺为超声提取，料液比为1∶15，提取温度为80℃，提取时间为60 min；菟丝子多糖具有抗脂质过氧化保护脑组织的作用。

【关键词】 菟丝子； 多糖； 提取工艺； 脂质过氧化

　　Abstract:ObjectiveTo optimize and establish the extraction technology of water-soluble polysaharides from Semen cuscutae and to inverstigate its anti-peroxidation effects on the irritated mouse brain tissues.MethodsThe orthogonal test was employed to test the effects of the three factors including volume of water, temperature of extrction and time of extration. The extraction technology was optimized. Malondialdehyde (MDA),superoxide dismutase(SOD)in the brain tissues were measured by colorimetry. ResultsThe extraction temperature and volume of water were significant factors. The decreased MDA levels were found in different dosage of polysaharides from Semen cuscutae (P0.05),and an increased SOD activity were obtained (P0.05). ConclusionThe optimum process is utrasonic extraction and the condition is as follows: the solid-liquid ratio is 1∶15, extraction temperature is 80℃, extraction time is 60 minutes. Polysaharides from Semen cuscutae has anti-lipid peroxidation which is effective in protecting the brain tissues.

　　Key words:Semen cuscutae; Soluble polysaharides; Extraction technology; Lipid peroxidation

菟丝子为常用补益中药，具有补肝肾，益精髓，明目的功效，主治腰膝酸痛、遗精、消渴、尿有余沥、目暗等疾病〔1〕。2000版《中国药典》规定为旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子，但在市场上其同属植物南方菟丝子Cuscuta australis R. Br.)已成为商品药材的主流品种〔2〕。近年来，菟丝子的研究多集中在对其黄酮类〔3，4〕和多糖〔5，6〕成分的研究，但利用超声提取菟丝子多糖的方法尚未见报道。脑组织脂质含量高，易受氧化损伤，有研究表明，脂质过氧化物在脑损伤的病理过程中起重要作用。本文采用正交分析的方法，设计并优化了菟丝子多糖超声提取工艺；并利用耐力游泳造成应激动物模型，通过测量脑组织SOD 和MDA 的含量，探讨菟丝子多糖对应激小鼠脑组织脂质过氧化物的影响。

　　1 仪器与材料

　　1.1 仪器

　　TCQ-250超声波清洗器；UV2000紫外－可见分光光度计；LD4-2低速离心机；TGL-16G台式高速离心机；旋转蒸发仪；JA12002电子天平。

　　1. 2 药材

　　菟丝子药材购自北京同仁堂，经中国医学科学院药物研究所龚宁波鉴定为Cuscuta australis R. Br.的干燥成熟种子。

　　1. 3 动物

　　昆明种雄性小鼠，体重（22. 0±2.3）g ，由中国医学科学院实验动物中心提供。

　　1. 4 试剂

　　SOD测试盒和MDA测试盒均由南京建成生物工程研究所提供。葡萄糖(精制)、浓硫酸、苯酚(重蒸)均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 样品的前处理菟丝子药材用无水乙醇回流2次，残渣风干，保存备用。

　　2.2 菟丝子多糖的提取流程菟丝子(超声水提取2次)→提取液(过滤)→滤液(浓缩)→浓缩液(醇沉)→沉淀复溶(除蛋白)→水溶液(醇沉)→菟丝子多糖粗品(洗涤，干燥)→菟丝子多糖

　　2.3 多糖含量测定

　　2.3.1 标准曲线的制作

　　按文献制作标准曲线，精密称取葡萄糖(105℃干燥4 h)40 mg定容至100 ml，配成浓度为0.4 mg/ml的葡萄糖溶液，取上述溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8 ml分别于10支试管中，加入蒸馏水至2ml，加入1ml5%苯酚溶液，摇匀后迅速加入5ml浓硫酸，摇匀后静置10min，置沸水浴中加热15 min，冷至室温，加水补至10 ml,于490 nm处测定A490，以0.0号管作空白，以A490作纵坐标，对应的糖含量作横坐标作标准曲线。标准曲线的回归方程为：A＝8.411 4C＋0.000 7，r＝0.999 6。

　　2.3.2 超声提取菟丝子多糖条件的优化

　　在单因素考察的基础上，确定料液比，提取温度，提取时间作为考察因素，每个因素拟订3个水平。见表1。表1 实验因素水平（略）

　　2.3.3 多糖的测定称取干燥后的菟丝子多糖30 mg，定容至50 ml，取1.0 ml加蒸馏水至2.0 ml，重复上述测定过程，记录吸光度值。

　　2.4 药理实验

　　2.4.1 动物分组及给药方式

　　将50只小鼠随机均分为正常组、对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。正常组自然饲养，其余各组分别采用生理盐水、菟丝子多糖溶液(100，200，400 mg/kg)灌胃，然后让小鼠在桶中游泳，水温约为18℃，当小鼠的四肢不能划水，头将要沉入水中即可将其捞出，用吹风机将小鼠身上的毛吹干，每天上下午依法各操作1次，连续7 d，期间禁食不禁水。