蓝玉簪龙胆对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化的治疗研究(一)
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作者：李鹏，唐坚, 李安，侯颖，田琼
【摘要】 目的观察蓝玉簪龙胆抗实验性大鼠肝纤维化的作用和可能的作用机理。方法30只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、二甲基亚硝胺(DMN)模型组、蓝玉簪龙胆组、强的松组和蓝玉簪龙胆+强的松组。除正常组外，各组大鼠均腹腔注射DMN，建立大鼠肝纤维化模型。造模的同时，各组给予相应的药物进行灌胃治疗，1次/d，共4周。正常组大鼠及DMN模型组灌胃生理盐水。检测血清中谷丙转氨酶和透明质酸，肝组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、单胺氧化酶和丙二醛水平。病理学观察苏木素-伊红（HE）和MASSON染色切片，光镜下观察。结果和DMN组相比蓝玉簪龙胆能明显降低DMN诱导的实验性肝纤维化大鼠肝组织中的MAO及MDA含量，升高SOD及GSH的含量；HE和MASSON染色观察到肝纤维化程度改善。结论蓝玉簪龙胆具有预防DMN诱导的肝纤维化作用，可能与它调节体内的脂质过氧化，抑制肝星状细胞(hepatic satellite cells, HSC)活化作用有关。
【关键词】 肝纤维化；蓝玉簪龙胆； 二甲基亚硝胺
Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of Gentiana veitchiorum on liver fibrosis induced by dimethylnitmsamine (DMN) in rats. Methods30 SD rats were randomly divided into control group，DMN group, Gentiana-treated group, prednisone-treated group and Gentiana+prednisone group．Rats in the DMN group, Gentiana-treated group, prednisone-treated group and Gentiana+prednisone group were suessively administered intraperitoneally with DMN (10 mg/kg/d)，3 days per week for 4 weeks to induce hepatic fibrosis．At the same time，Gentiana-treated group was administered with Gentiana (4 g gruff/kg) i.g., prednisone-treated group was administered with prednisone (6 mg/kg) i.g., Gentiana+prednisone group was administered with Gentiana+prednisone (4g gruff+6mg/kg) i.g. for 4 weeks respectively. Control group received normal sodium (NS) only．The contents of ALT and HA in blood, SOD, MDA, GSH, MAO levels in hepatic tissue bomogenate were measured．Pathological changes with HE staining and MASSON staining were observed under light microscope．Resultspared with the model group, the contents of MAO, MDA declined significantly and the contents of GSH, SOD were increased significantly in Gentiana-treated group (P0.05)．Fibrosis degree of liver was ameliorated when treated with Gentiana．ConclusionGentiana has anti-fibrosis effects against liver injury induced by DMN and can be used in preventing the development of hepatic fibrosis by reducing the lipid peroxidation and suppressing the activation of hepatic satellite cells (HSC)．
Key words：Hepatic fibrosis； Gentiana veitchiorum； Dimethylnitmsamine
肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)是继发于各种原因引起的肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应，以细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝内过量沉积为病理特征〔1，2〕。肝纤维化的治疗以糖皮质激素为首选药物，但是对于糖皮质激素对免疫系统产生的副作用无特效改善药物。我们早期的研究显示，蓝玉簪龙胆花水煎液可以提高大鼠肺组织中的SOD活性，改善氧化/抗氧化平衡，抑制胶原沉积，保护肺组织免受纤维化损伤〔3〕。在肝纤维化中，蓝玉簪龙胆能否具有此种效能有待实验验证，本实验采用藏药蓝玉簪龙胆稠膏对实验性肝纤维化进行干预，初步讨论其对肝纤维化的作用及其机理。
1 材料和方法
1.1 材料
二级雌性SD大鼠30只，体质量（192.8±11.5）g，由本校动物中心提供。二甲基亚硝胺（DMN）购自天津市化学试剂研究所，批号20061026；强的松片由西安利君沙制药股份有限公司生产，批号：20050110；蓝玉簪龙胆采自西藏高原，为蓝玉簪龙胆的花及茎叶；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、单胺氧化酶（MAO）、丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号分别为20070427，20040424，20070427，20070427；透明质酸（HA）放免剂盒购自上海海研医学生物技术有限公司，批号为20070401。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的建立
30只大鼠随机分为5组，每组6只：正常对照组、二甲基亚硝胺模型组（DMN组）、蓝玉簪龙胆治疗组（LYZ组）、强的松治疗组（强的松组）、蓝玉簪龙胆+强的松治疗组（LYZ+强组），参照JENKINS等〔4，5〕介绍的制备DMN诱导大鼠肝纤维化模型的方法。其中正常对照组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射生理盐水，DMN组、LYZ组、强的松组、LYZ+强组按2 ml/kg体重剂量腹腔注射(5 mg/L)DMN溶液，每周连续注射3 d，共4周。
1.2.2 治疗
建模当日对各组动物进行治疗：①正常对照组：每日按0.5 ml/100 g体重生理盐水灌胃；②二甲基亚硝胺对照组（DMN组）：每日按0.5 ml/100 g体重生理盐水灌胃；③蓝玉簪龙胆治疗组（LYZ组）：蓝玉簪龙胆稠膏由第四军医大学第三附属医院药剂科制作，主要成分为蓝玉簪龙胆，1 g蓝玉簪龙胆稠膏相当于0.852 1 g龙胆花生药，高效液相色谱结果表明藏药蓝玉簪龙胆中主要成分龙胆苦苷的百分含量为1.97%〔6〕。每日按4 g生药ㄍkg体重量灌胃；④强的松治疗组：将强的松片研成粉末，加蒸馏水配制成0.06％的溶液，参照文献〔7〕按6 mg/kg体重进行灌胃;⑤蓝玉簪龙胆+强的松治疗组（LYZ+强组）：蓝玉簪龙胆稠膏每日按4 g生药ㄍkg体重灌胃，强的松按6 mg/kg体重进行灌胃。