巴西蜂胶最佳提取工艺研究(一)

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作者：付梅红，方婧，王祝举，唐力英

【摘要】 　　目的　建立巴西蜂胶最佳提取工艺。方法进行了不同提取溶剂、不同提取时间、不同提取温度、不同料液比、不同提取次数的考察，以总黄酮为检测指标，优选提取工艺。结果最佳提取工艺为：加入蜂胶量40倍的80%乙醇，40℃提取4 h，提取两次。结论该提取工艺合理、可行。

【关键词】 巴西蜂胶； 提取工艺； 总黄酮

　　Abstract:ObjectiveTo study the extraction method of total flavonoids in Brazilian propolis.MethodsWith the content of the total flavonoids as the index, the effect of ethanol concentration, extraction time, extraction temperature and solvent quantity on recovery rate of total flavonoids was studied.ResultsThe best extraction condition was :adding 40 fold 80% ethanol, the temperature of circumfluence was 40℃ and the time of extraction was 4 h.ConclusionThis extraction method is convenient and feasible.

　　Key words:Brazilian propolis; Preparative technique; Total flavonoids

蜂胶为蜂的干燥分泌物。具有抗菌消炎、调节免疫、抗氧化、加速组织愈合等功效〔1〕。蜂胶成分比较复杂，其中有黄酮类化合物，以及多种氨基酸、脂肪酸、酶类、维生素、微量元素等成分，黄酮类化合物是蜂胶中的主要活性成分。因此在提取工艺的研究中，选择以总黄酮（以芦丁计）为定量指标，优选蜂胶提取工艺条件。目前文献报道均为国产蜂胶最佳提取工艺研究，未见产地为巴西的蜂胶最佳提取工艺研究。因此笔者对巴西地产蜂胶原料的最佳提取工艺进行了如下研究。

　　1 材料与仪器

　　1.1 材料药材，产于巴西，由北京伊瓜苏国际投资咨询有限公司提供。对照品，芦丁购自中国药品生物制品检定所（0080-9705）。聚酰胺粉（100-200目），水为去离子重蒸水，试剂均为分析纯。

　　1.2 仪器紫外-可见分光光度仪（Agilent 8453E）。超声波清洗器（功率150W，频率20kHz）。

　　2 方法

　　2.1 方法的建立

　　采用可见-紫外分光光度仪测定总黄酮（以芦丁计）含量〔2〕。

　　2.1.1 对照品溶液的制备

　　精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。

　　2.1.2 供试品溶液的制备

　　取本品粉末（过三号筛）约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇10 ml，40℃温浸4 h，取出，放冷，摇匀，滤过，重复提取1次。合并滤液，精密量取续滤液1ml于蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌匀，于水浴上挥干溶剂，转入层析柱。先用20 ml苯洗，弃去苯液，然后用甲醇洗脱，定容至25 ml。摇匀，即得。

　　2.1.3 测定

　　分别取对照品溶液和供试品溶液，于波长360 nm测定吸收值。以芦丁为标准品测定标准曲线，求回归方程，计算供试品中总黄酮含量。

　　2.2 提取工艺的考察

　　2.2.1 线性关系考察精密吸取浓度为0.5 mg/ml的芦丁对照品溶液1，2，3，4，5 ml于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，转入比色管中，于波长360 nm比色。结果表明，芦丁在0.05～0.25 mg之间呈良好的线性关系，r=0.999 2。见表1及图1。表1 芦丁线性关系考察
溶质量m/mg吸光度（略）

　　2.2.2 不同浓度乙醇的考察取本品粉末（过3号筛）约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入不同浓度的乙醇25 ml，超声处理30 min，取出，放冷，摇匀，滤过。精密量续滤液1 ml于蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，拌匀，于水浴上挥干溶剂，转入层析柱。先用20 ml苯洗，弃去苯液，然后用甲醇洗脱，定容至25ml。摇匀，于波长360 nm测定吸收值，以回归方程计算供试品中总黄酮含量。结果见表2及图2。同时测定了各个样品的出膏率。结果见表3及图3。表2 不同浓度乙醇考察（略）表3 不同浓度乙醇出膏率考察样品号干膏重/g出膏率（）