棒曲霉菌中抗真菌肽的分离与纯化(一)

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【关键词】 ,棒曲霉菌;分离;真菌蛋白类

〔摘要〕 〔目的〕 从棒曲霉菌培养上清液中分离纯化具有抗真菌活性的肽类物质（AFP）. 〔方法〕 用离子交换柱层析法分离AFP，利用反相高效液相色谱法进一步纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确定相对分子质量. 〔结果〕 从棒曲霉菌培养上清液中分离出1种具有抗真菌活性的AFP，纯化后得到高活性的精制AFP，相对分子质量约为8ku，MTT法测定结果表明AFP对5种真菌均具有明显的抗真菌作用. 〔结论〕 棒曲霉菌培养上清液中含具有抗真菌活性的AFP.

　〔关键词〕 棒曲霉菌;分离;真菌蛋白类

ABSTRACT:OBJECTIVE To purify the peptide with antifungal activity from Aspergillus clavalus desm culture fluid.METHODS The peptide was separated by ion exchange column chromatography and further purified by reverse phase HPLC，and the molecular weight was determined by tricine gel electrophoresis.RESULTS A kind of peptide with antifungal activity was separated.The molecular weight was about8ku.The detection result by MTT method showed significant antifungal activity of the peptide to5kinds of fungi.

CONCLUSION There has antifungal peptide in Aspergillus clavalus desm culture fluid.Key words:Aspergillus clavalus desm;dissection;fungal proteins

真菌在自然界分布广泛，其中有些真菌可使人致病，而在有些真菌中则可提取抗生素或防腐剂等.本文从棒曲霉菌（Aspergillus clavalus desm）培养上清液中分离得到具有抗真菌作用的肽类物质真菌抑制肽（antifungal peptide，AFP），旨在为抗菌药物及防腐剂的开发提供依据.

　1 材料与方法

1.1 材料 棒曲霉菌菌种由韩国科学技术研究院生命工学研究所提供;CM-Sepharose离子交换树脂为瑞典Pharmacia公司产品;YPD，YM培养基及MTT试剂为美国DIFCO公司产品.超滤浓缩系统 为Millipore公司产品;700型高效液相色谱仪和 500型酶标仪为美国BIORAD公司产品;全自动层 析仪为北京应用新技术研究所产品.

　1.2 方法

1.2.1 粗提液的制备 将棒曲霉菌置于YPD培养液中，振动培养（30℃）72h，取上清液用超滤方法（膜截留分子质量为30ku）除去大分子蛋白，取滤过 液，4℃保存，待进一步纯化.

1.2.2 CM-Sepharose离子交换柱层析 用0.1mol/L Tris-HCl（pH值为7.0）缓冲液，将CM-Sepharose柱（30cm×26cm）洗柱平衡，待稳定后将粗提液上柱，速度为80mL/h，完毕后用0.1mol/L Tris-HCl（pH值为7.0）缓冲液洗柱，然后用含1.0mol/L氯化钠的0.1mol/L Tris-HCl（pH值为7.0）缓冲液进行洗脱，利用紫外分光光度仪于波长280nm处进行检测，记录洗脱曲线，收集出现峰值的洗脱液.