逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠模型胸水和血清中bFGF及生存期的影响(一)

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作者：李竹英，刘建秋，吉俊嵘

【摘要】 　　目的：观察逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠模型胸水和血清中bFGF及生存期的影响。方法：采用艾氏腹水瘤细胞株传代培养后大鼠胸腔注射造模，用ELISA法测定血清和胸水中bFGF的含量。通过计算中位生存时间和生命延长率观察恶性胸水大鼠的生存期。结果：模型组、中药组、顺铂组血清bFGF含量明显高于空白对照组；中药加顺铂组血清bFGF含量高于空白对照组；中药加顺铂组、中药组、顺铂组血清和胸水中bFGF含量明显低于模型组；中药加顺铂组血清和胸水中bFGF含量明显低于中药组和顺铂组；顺铂组血清和胸水中bFGF含量与中药组相近。中药组、顺铂组、中药加顺铂组中位生存期较模型组明显延长；中药加顺铂组中位生存时间和生命延长率较顺铂组及中药组明显延长；顺铂组中位生存时间和生命延长率较中药组略延长。结论：逐饮Ⅰ号可明显降低血清和胸水中bFGF的含量；明显延长恶性胸水大鼠的生存期；通过降低恶性胸水大鼠血清和胸水中bFGF的含量而达到防治恶性胸水的作用。

【关键词】 逐饮Ⅰ号 恶性胸水大鼠模型 血清bFGF 胸水bFGF 生存期

　　恶性胸水是恶性肿瘤的常见并发症之一，有关调查资料显示〔1〕，约半数肺癌患者最终会发生恶性胸水。恶性胸水的形成常常标志着疾病已进入晚期，未经治疗者多在胸水出现后1～6个月(平均2个月)内死亡〔2〕。近年来，中医药在抗恶性胸水方面逐渐显示出其优势。本研究观察了逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠bFGF及生存期的影响，现总结如下：
　　
　　1 实验材料

　　1.1 瘤株 艾氏腹水瘤(EAC)细胞株，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

　　1.2 动物 Wistar大鼠，清洁级，190～210 g，由黑龙江省肿瘤医院实验动物中心提供。

　　1.3 实验药物与试剂 (1)逐饮Ⅰ号：由黑龙江中医药大学附属一院药厂提供。经水煎取汁，醇沉，浓缩而成(药物组成：葶苈子、白术、椒目、茯苓、黄芪、桂枝、山慈菇、薏苡仁、甘草)。(2)顺铂(DDP)：50 mg/50 mL，FH科鼎有限公司生产，产品批号：T05881AB。(3)双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法大鼠血清bFGF试剂盒，双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法大鼠胸水bFGF试剂盒，均购自大连泛德生物有限公司。

　　1.4 实验仪器 (1)光学显微镜；(2)酶标检测仪；(3)Mode1550酶联分析仪；(4)超净工作台；(5)超低温冰箱：MDF?328；(6)台式高速离心机；(7)细胞计数板；(8)洗板机；(9)恒温孵育器：Eppendorf德国；(10)低温真空冷冻干燥箱；(11)精密移液器。

　　2 实验方法

　　2.1 动物分组 100只大鼠随机分为正常对照组(A)、模型组(B)、中药组(C)、顺铂组(D)、中药加顺铂组(E)5组，20只/组，其中8只做为生存期观察。

　　2.2 动物模型的制备 恶性胸水模型的制作参照何欣〔3〕、田鑫〔4〕的方法进行改良。艾氏腹水癌细胞株，每周传代1次，取荷瘤7d的昆明种小鼠，抽取小量腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度，胸腔注射上述浓度的肿瘤细胞悬液，B、C、D、E组每只0.3 mL，共造模80只。A组同样方法胸腔注射生理盐水0.3 mL作为空白对照组。

　　2.3 给药 (1)空白对照组(A组)：以1.5 mL/d生理盐水灌胃，1次/d。(2)模型组(B组)：以1.5 mL/d生理盐水灌胃，1次/d。(3)中药组(C组)：予逐饮Ⅰ号按生药量10.8 g/(kg・d)剂量灌胃，1次/d。(4)顺铂组(D)：顺铂以生理盐水1∶1稀释，按1 mg/(kg・d)，腹腔注射，隔日1次。(5)中药加顺铂组(E)：予逐饮Ⅰ号按生药量10.8 g/(kg・d)灌胃，并予顺铂以生理盐水1∶1稀释，按1 mg/(kg・d)，腹腔注射，隔日1次。
　　
　　于造模次日，A、B组予生理盐水灌胃7 d，C、E组予中药灌胃7 d，D、E组予DDP，7 d中隔日腹腔注射给药。

　　2.4 取材及样品处理 造模后第8 d，5组中除观察生存期的8只，其余腹腔注射1.5%戊巴比妥钠(0.3 mL/100m2)麻醉。(1)大鼠血清bFGF的测定。(2)大鼠恶性胸水bFGF的测定。(3)逐饮Ⅰ号对恶性胸水大鼠生存期的影响。
　　
　　从造模次日观察，共给药7 d，每日统计大鼠的死亡数量，于21 d为止，超过21 d按21 d计算。计算各组中位生存时间及生命延长率。

　　2.5 统计学方法 实验数据采用统计软件SPSS 13.0进行统计，全部数据均采用均数加减表示(±s)，组间比较用t检验，P＜0.05有统计学意义。

　　3 实验结果

　　3.1 对各组血清中bFGF的影响 见表1。

　　表1 逐饮Ⅰ号对各组大鼠血清bFGF含量的影响（略）

　　注：与空白组比较，#P＜0.05，##P＜0.01;与模型组比较，▲P＜0.01；与中药加顺铂组比较，☆P＜0.05；与顺铂组比较，△P＞0.05

　　3.2 对各组大鼠胸水bFGF的影响 见表2。

　　表2 逐饮Ⅰ号对各组大鼠胸水bFGF含量的影响（略）

　　注：与模型组相比较，▲P＜0.01；与中药加顺铂组比较，☆P＜0.05；与顺铂组比较，△P＞0.05

　　3.3 对各组大鼠生存期的影响 见表3。

　　表3 逐饮Ⅰ号对各组大鼠生存期的影响（略）

　　表3显示：中位生存时间和生命延长率依次为中药加顺铂组＞顺铂组＞中药组。