高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含量(一)

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【关键词】 丹参素；,,,,原儿茶醛；,,,,丹参酚酸B,,;,,高效液相色谱法,;,,,含量测定

　　摘要：目的建立反相高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分的含量。方法以标准品丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B为内标,色谱柱: KromasilC18柱(4.6×20 mm,5 μm)；流动相：流动相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90∶4∶2），流动相 B：甲醇。梯度洗脱;流速：1.0 ml/min；检测波长：281 nm。结果丹参素加样回收率为97.59%～101.66%，RSD为1.50%（n=6）；原儿茶醛加样回收率为97.19%～101.25%，RSD为1.90%,（n=6)；丹参酚酸B加样回收率为100.39%～102.11%，RSD为0.6%，(n=6)。结论实验结果表明，该方法操作简便，重现性好,可作为样品的检测方法。

　　关键词：丹参素； 原儿茶醛； 丹参酚酸B ; 高效液相色谱法 ; 含量测定

　　Determination of Water-solubility ponent in Danhong Injection by HPLC

　　Abstract:ObjectiveAn HPLC method was developed to separate and determine salvianic acid , protocatechuic aldhyde and salvianolic acid B in Injection Danhong。MethodsSeparation was performed on an Kromasil C18(5 μm,4.6 mm×20 mm) with water-dimethylformanide -glacial acetic acid (90∶4∶2)as mobile phase and determination at 281nm . ResultsThe recoveries were between 97.59 and 104%. And RSD was not more than 2.0%。Conclusion The method is simple,rapid and reproducible for determination of salvianic acid and protocatechuic aldhyde in Injection Danhong.

　　Key words:Salvianic acid ； Protocatechuic aldhyde ； Salvianolic acid B ； HPLC ； Determination

　　我医院常用的丹红注射液，已临床使用多年，具有活血化瘀、理气止痛的功效。用于胸中憋闷，心绞痛等症，疗效显著。丹红注射液的君药丹参的主要有效成分为丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分，但目前注射液还没有对此3个成分同时进行含量测定。为了更好的控制本品的质量，本实验采用高效液相色谱 HPLC法分别测定了丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B的含量。

　　1 器材

　　高效液相色谱仪（日本岛津Agellen；SPD-10AVP紫外检测器；N2000数据处理系统）；KromasilC18柱(4.6 mm×20 mm,5 μm)；丹参素对照品（含测用,上海医科大学药学院）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所,110810-200205）；丹参酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，111562-200302）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，二甲基甲酰胺、冰醋酸等其它试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适用性实验〔1〕用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90∶4∶2），流动相B：甲醇。梯度洗脱的时间和流动相的比例见表1。表1 丹参水溶性成分的流动相（略）

　　2.2 供试品溶液及对照品溶液的制备丹参素对照品溶液的制备：精密称取丹参素对照品10.80 mg于25 ml容量瓶中，加甲醇定容成25 ml，制成每毫升含0.432 mg的丹参素对照品溶液。

　　原儿茶醛对照品溶液的制备：精密称取原儿茶醛对照品7.10 mg于10 ml容量瓶中，加甲醇定容成10 ml，制成每毫升含0.71 mg的原儿茶醛标准溶液。

　　丹参酚酸 B对照品溶液的制备：精密称取丹参酚酸 B对照品9.95 mg于25 ml容量瓶中，加甲醇定容成25 ml，制成每毫升含0.398 mg的丹参酚酸 B对照品溶液。

　　混合标准溶液的制备：精密吸取以上各对照品溶液各5 ml，混匀，作为混合对照品溶液。

　　丹参供试品溶液制备：取丹红注射液适量，加水稀释后，即得丹参药材供试品溶液。

　　2.3 专属性考察在选定条件下，供试品中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B可与其它组分基线分离，与邻近色谱峰的分离度 R＞1.5，按丹参素峰计算理论板数 n为3 000。将丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B对照品溶液、丹参药材供试液在上述条件下进样，图谱见图1~2。