大孔吸附树脂同步提取湖北麦冬总多糖和总皂苷(一)
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作者：刘霞 张琼光 向阳 詹亚华 陈科力
【摘要】 目的研究湖北麦冬中总多糖和总皂苷的提取、分离方法。方法应用大孔吸附树脂提取湖北麦冬中的总多糖和总皂苷。结果分别得到含量为66.52%的总多糖及含量为81.15%的总皂苷。结论运用大孔吸附树脂可以同步提取湖北麦冬中的总多糖和总皂苷，有利于湖北麦冬中总多糖和总皂苷的综合利用。
【关键词】 湖北麦冬 总多糖 总皂苷 综合利用
湖北麦冬Liriope spicata (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. T. Ma是中药山麦冬的主要来源之一，是湖北省的道地药材，具有养阴生津、润肺清心的功效，用于肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、肠燥便秘等症〔1〕。湖北麦冬含多糖及皂苷类成分〔2〕，两者都是湖北麦冬的活性成分，其多糖有降血糖、延缓衰老、抗疲劳辅助抑制肿瘤、抗辐射等作用〔3〕；所含皂苷类成分在免疫系统、心血管系统等方面具有良好的活性〔4〕。
对于湖北麦冬中的总多糖及总皂苷，目前多为单独提取和纯化，常造成了另一大类有效成分的浪费，不利于湖北麦冬的综合利用。本文运用大孔吸附树脂法同步提取湖北麦冬中的总皂苷和总多糖，有利于湖北麦冬中总多糖和总皂苷的综合利用。
1 材料与仪器
Agilent 8453紫外-可见分光光度仪，R205星海旋转蒸发器（无锡市星海王生化设备有限公司），DZF-2002真空干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）。
湖北麦冬购自湖北省襄樊市欧庙镇，经湖北中医学院鉴定教研室陈科力教授鉴定为湖北麦冬Liriope spicata (Thunb.) Lour. var. prolifera Y. T. Ma。麦冬皂苷D对照品由中药固体制造技术国家工程研究中心提供，批号：1214-080228，纯度≥98%。D-无水葡萄糖对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110833-200503。D-101大孔吸附树脂（天津农药股份有限公司），水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总多糖的含量测定方法〔5〕
2.1.1 供试品溶液的制备取总多糖0.1 g，精密称定，用蒸馏水溶解并定容至100 ml，精密吸取0.2 ml分别置于干燥具塞试管中，补加蒸馏水至1.0 ml，摇匀，得供试液。
2.1.2 线性关系考察精密称取105℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品10.40 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml，分别置干燥具塞试管中，补加蒸馏水至1.0 ml，再各加苯酚试液1.0 ml，摇匀，滴加浓硫酸5.0 ml，迅速摇匀，放置5 min，置沸水浴中加热15 min，取出，冷水冷却至室温。另取蒸馏水1.0 ml，加苯酚试液同法操作，作为空白对照。按分光光度法在486 nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（Y），绘制标准曲线，求得回归方程：Y=9.105 1X+0.093 4，r=0.999 1。
2.1.3 总多糖的含量测定供试品溶液按“2.1.2”项下自“加苯酚试液1.0 ml”起，同法操作，测定吸光度。2.2 总皂苷的含量测定方法
2.2.1 供试品溶液的制备取总皂苷0.1 g，精密称定，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 对照品溶液的制备精密称取麦冬皂苷D对照品10.42 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 测定波长的选择精密称取葡萄糖10.31 mg，按对照品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2 ml，置具塞试管中，挥去甲醇，加入高氯酸10 ml，混匀，65℃水浴加热15 min，冰水浴冷却，终止反应后按分光光度法测定吸光度，对照品溶液、供试品溶液在317 nm处有最大吸收峰，阴性对照溶液无干扰。结果见图1。因此选317 nm为麦冬总皂苷的测定波长。
1.对照品 2.供试品 3.葡萄糖
图1 湖北麦冬总皂苷含量测定波长选择图（略）
2.2.4 线性关系考察精密吸取麦冬皂苷D对照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0 ml，分别置干燥具塞试管中，挥去甲醇，加入高氯酸10 ml，混匀，65℃水浴加热15 min，冰水浴冷却，终止反应后按分光光度法测定吸光度，以浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（Y），绘制标准曲线，求得回归方程：Y=6.991 4X+0.035 2，r=0.999 9。
2.2.5 总皂苷的含量测定精密吸取供试品溶液1 ml，按“2.2.3”项下自“置具塞试管中，挥去甲醇，加入高氯酸10 ml”起，同法操作，测定吸光度。
2.3 大孔吸附树脂的前处理取D-101大孔吸附树脂，用乙醇浸泡过夜，使充分溶胀，湿法装柱。然后用乙醇冲洗，至洗脱液在试管中加水稀释不浑浊，且洗脱液在200～400 nm扫描无吸收峰为止。再用水洗去乙醇。
2.4 湖北麦冬药材的提取湖北麦冬药材2 kg加10倍水提取3次，1 h/次，滤过，合并。滤液冷却至室温，备用。
2.5 总皂苷及总多糖的提取及纯化将“2.4”项下提取液通过处理后的大孔吸附树脂柱，用蒸馏水洗脱，至Mollish反应呈现阴性，然后用70%乙醇洗脱，收集洗脱液，至Liberman反应呈阴性。