川芎配方颗粒高效液相色谱指纹图谱研究(一)
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作者：韩丽，黄媛莉，杨明，谢秀琼
【摘要】 目的建立川芎配方颗粒高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法应用Kromasil KR-100-5 C18柱，0.5％磷酸水溶液和甲醇进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，检测波长为240 nm，柱温为20℃。结果得到分离度、重复性均较好的川芎配方颗粒HPLC指纹图谱，标示了11个共有峰，对10批川芎配方颗粒HPLC指纹图谱进行相似度评价，并与川芎饮片HPLC指纹图谱进行比较研究。结论川芎配方颗粒HPLC指纹图谱的建立，为其质量控制提供了依据。
【关键词】 川芎配方颗粒； 高效液相色谱； 指纹图谱
Abstract：ObjectiveTo establish the analytical method for the fingerprint of Chuanxiong Dispensing Granules by HPLC. MethodsSeparation was performed on a Kromasil KR-100-5 C18 column, with mobile phase consisting of 0.5% phosphoric acid-water and methanol and with gradient elution at the flow rate of 1.0 ml/min. The UV detection wavelength was 240 nm, column temperature was 20℃. ResultsAn HPLC fingerprint for Chuanxiong Dispensing Granules was established Both fidelity and reparability were good. It had 11 mon peaks. ConclusionAording to the foundation of HPLC fingerprint, we can control the quality of Chuanxiong Dispensing Granules.
Key words：Chuanxiong Dispensing Granules； HPLC； Fingerprint
川芎配方颗粒为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎经加工制成的配方颗粒，主要含生物碱类、有机酸类和挥发油类成分。功能活血行气、祛风止痛，用于治疗月经不调、经闭痛经、症瘕腹痛、胸胁刺痛、跌扑肿痛、头痛、风湿痹痛〔1〕。目前，对川芎药材的指纹图谱多有报道〔2～5〕，但对其配方颗粒指纹图谱以及与饮片指纹图谱的比较研究尚未见报道。本文采用高效液相色谱法对川芎配方颗粒进行了研究，得到分离度、重复性均较好的指纹图谱，利用高效液相色谱技术对其主要色谱峰进行了初步归属，同时对10批川芎配方颗粒指纹图谱进行了相似度评价，并与川芎饮片指纹图谱进行比较研究，为川芎配方颗粒全面质量控制提供依据。
1 仪器与试药
Waters2695_2996高效液相色谱仪；Empower色谱工作站；甲醇（色谱纯，Fisher）；磷酸（分析纯）；水（Milli－Q级）；川芎配方颗粒10批（为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎经加工制成的配方颗粒，四川绿色药业科技发展股份有限公司提供）；川芎饮片3批（上述10批川芎配方颗粒的投料饮片，四川绿色药业科技发展股份有限公司提供）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所提供）。
2 方法
2.1 供试品溶液的制备取本品粉末0.5 g，加甲醇20 ml，水浴回流提取1 h，滤过，挥去部分溶剂，转移至10 ml容量瓶中，甲醇定容，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2 参照物溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。
2.3 色谱条件及测定方法色谱柱为Kromasil KR-100-5 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.5％磷酸水溶液（A）和甲醇（B），梯度洗脱为0～3min（85%A），3～55min（85%A～10%A），55～60 min（10%A）；流速1.0 ml/min；检测波长240 nm；柱温20℃；记录时间为60 min；采样频率为每秒采一个数据点；泵模式5 ml/min；进样量10 μl。
2.4 方法学考察
2.4.1 空白实验吸取甲醇10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白溶剂无干扰。
2.4.2 参照物实验吸取阿魏酸参照物溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，其主峰的保留时间用于确定川芎配方颗粒中阿魏酸的峰位。
2.4.3 仪器精密度实验取同一供试品溶液，连续进样6次。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，仪器精密度良好。
2.4.4 稳定性实验取同一供试品溶液，分别在0，1，2，4，8，12，24，48 h进行检测。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，表明样品48 h内稳定性良好。
2.4.5 重复性实验取同一批号供试品，按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液6份，进样检测。同时取峰面积大于总峰面积的3.0%的色谱峰保留时间峰面积进行统计，其保留时间的相对标准偏差RSD均低于1%，重复性良好。