半边旗中黄酮的提取工艺研究(一)
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作者：吕应年 邓亦峰， 梁念慈
【摘要】 目的确定提取半边旗总黄酮的最佳工艺条件，并精制以提高黄酮的含量。方法采用正交实验法，考察溶剂用量、乙醇浓度、提取时间以及提取次数对半边旗中总黄酮溶出量的影响，确定最佳提取条件，然后对半边旗总黄酮进行精制，用高效液相色谱测定已知黄酮的含量。结果在所考察的因素中，对半边旗总黄酮提取影响程度为乙醇浓度>提取次数>溶剂用量>提取时间，半边旗总黄酮最佳提取条件为12倍用量80%乙醇回流提取2次、每次回流2 h，精制后半边旗黄酮含量达到84.3%以上。结论 该工艺设计合理，操作简单，生产成本低廉，有较高的工业生产应用价值。
【关键词】 半边旗 黄酮 正交实验 精制
Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction conditions for flavonoids from Pteris semipinnata L., and refine the flavonoids to improve the purity. MethodsOptimized conditions including ethanol quantity, ethanol concentration , reflux duration and extraction times were determined by the orthogonal test. The flavonoids were refined with different solutions and the purity was determined by HPLC. ResultsThe order of factors to affect the flavonoid extraction was ethanol concentration > extraction times > ethanol quantity > reflux duration. The best extraction technology was that 12-fold and 80% ethanol, refluxing for 2 hour at water bath and 2 times of extraction. The purity of refined flavonoids was up to 84.3%. ConclusionThis technology is simple,reasonable and the cost is lower, which is suitable for industralization.
Key words：Pteris semipinnata L.; Flavonoids; Orthogonal test; Refine
半边旗Pteris semipinnata L.，又名半边蕨、半边莲、单边旗，系凤尾蕨科植物，是一种南方常用草药，始载于《岭南采药录》，称半边旗。该植物有止血、生肌、解毒、消肿之功效，民间用于治疗吐血、外伤出血、发背、疔疮、跌打损伤、目赤肿痛等〔1〕。现代研究表明，半边旗中含有挥发油、萜类、黄酮、皂苷等多种物质〔2〕。有关半边旗的药效成分研究主要集中在萜类化合物〔3,4〕，半边旗中黄酮类物质的研究报道较少。
黄酮类化合物是中草药中一类重要的药效成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血脂等广泛的生物活性，天然黄酮主要以游离的苷元或与糖结合成糖苷的形式存在于植物中。本研究采用正交实验法考察溶剂用量、乙醇浓度、提取次数、提取时间对半边旗总黄酮溶出量的影响，以确定最佳提取条件，并研究了半边旗黄酮的精制方法，为合理开发利用半边旗资源提供依据。
1 器材
岛津LC-10A高效液相色谱仪(LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10AVP柱温箱)；紫外分光光度计(岛津UV3101PC)；分析天平（Mettler, AE240）；旋转蒸发仪（上海申越科学仪器公司）；四用紫外分析仪（上海顾村科学器材厂）。芹菜素和木犀草素标准品购于天津尖峰植物提取物公司，甲醇为色谱纯（TEDIA pany Inc. USA），提取及精制用乙醇、氯仿、醋酸乙酯均为分析纯（广州大华试剂公司），其他化学试剂均为分析纯。半边旗植物采收于广东湛江郊区，经广东海洋大学杨燕君副教授鉴定为半边旗。
2 方法与结果
2.1 半边旗总黄酮的测定
2.1.1 标准曲线绘制参照文献〔5〕，采用紫外分光光度计法并适当调整。精密称定干燥至恒重的芦丁对照品2 mg，加适量甲醇溶解，定容到10 ml即得对照品储备液。精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml对照品储备液于50 ml容量瓶中，加甲醇至20 ml，加入5%亚硝酸钠溶液2 ml，摇匀，放置5 min，加入10%硝酸铝溶液2 ml，摇匀，放置6 min，加入新配制的5%氢氧化钠溶液20ml，用甲醇定容至50ml，用分光光度计于500 nm处测定吸光度。以浓度(C)与相应的吸光度(A)进行回归分析，得回归方程A=0.163 2C+0.056 4，r=0.997 6。
2.1.2 样品总黄酮的测定称取干燥半边旗粗粉10 g，加入含溶剂的圆底烧瓶中，按表1的实验设计进行回流提取，过滤，取滤液挥干溶剂，残留物用甲醇溶解，定容到50 ml，即得样品溶液，用分光光度计测定500 nm处的吸光度值，由标准曲线计算样品总黄酮溶出量。