空心莲子草正丁醇部位高效液相色谱指纹图谱研究(一)

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作者：王佳馨， 陈树和， 方念伯， 刘焱文

【摘要】 目的建立空心莲子草正丁醇部位的高效液相色谱（HPLC-ELSD）指纹图谱。方法HPLC-ELSD法测定，流动相为乙腈-水梯度洗脱，流速为1.0 ml・min-1，蒸发光散射（ELSD）检测器，柱温35℃。结果运用梯度洗脱能较好的分离空心莲子草正丁醇部位化合物；经方法学考察，HPLC-ELSD指纹图谱具有良好的重复性，初步建立了以12个共有峰为特征指纹信息的HPLC-ELSD指纹图谱。 结论建立的空心莲子草正丁醇部位的HPLC-ELSD指纹图谱分析法可为空心莲子草的质量评价提供参考。

【关键词】 空心莲子草； 指纹图谱； 高效液相色谱； 蒸发光散射检测器

Abstract:ObjectiveTo establish the HPLC-ELSD of n-butylol froution of Altemanthera philoxeroide.MethodsThe gradient elution was adopted with a mixture consisting of acetonitrile and water, the flow rate was 1.0 ml・min-1，and the detector was ELSD. ResultsThe constituents of Altemanthera philoxeroide were well separated on HPLC and the HPLC-FPC of 10 batches of samples was established.The results showed that this method had a good repeatability and the 12 mon peaks had an exclusive properties.ConclusionThe method developed can supply the reference for the quality eva luation of Altemanthera philoxeroide.

Key words:Altemanthera philoxeroide； Fingerprint chromatography； HPLC； ELSD

空心莲子草Altemanthera philoxeroides (Mart.)Griseb为苋科(Amaranthaeeae) 莲子草属Ahemanthera多年生宿根草本植物,又名空心苋、螃蜞菊、水花生、喜旱莲子草。据《中药大辞典》记载：本品之根味苦，性寒；茎叶味微甘，性寒，具有清热、凉血、解毒、利尿的功效，适用于淋症、麻疹、疔疮及热毒诸症。临床研究发现空心莲子草具有抗病毒、抗菌、护肝等作用，被用于治疗流感、麻疹、单纯性疱疹、流行性出血热、黄疸肝炎、乙型肝炎等疾病〔1〕。空心莲子草含有多种化学成分，其中黄酮、三萜和皂苷类是其主要成分〔2〕。空心莲子草主要分布在长江流域，笔者从湖北、湖南、浙江、福建、江西、江苏6个省10个城市不同地方采集了空心莲子草，采用HPLC-ELSD法建立了空心莲子草正丁醇部位的指纹图谱，为空心莲子草的质量评价提供了一定依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂 Agilent1100高效液相色谱仪系列，ELSD检测器（SEDEX 75），G1311A四元梯度泵，G1322A在线真空脱气装置，G1314A柱温箱；Mettler Toledo AT20型分析天平（万分之一）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-S型水浴锅（郑州长城科工贸有限公司）；D101型大孔吸附树脂（天津市海光化工有限公司）；微孔滤膜（0.2 μm）。试剂：乙腈（色谱纯）；醋酸乙酯、正丁醇、95%乙醇、甲醇（均为分析纯）；实验用水为二次重蒸水。

1.2 药材来源 空心莲子草药材1～10号样品均为2005-07～08分别采自湖北、湖南、浙江、江苏、江西、福建6省（均为水中生长）。见表1。

表1 样品的来源产地

样品号产地1江西九江浔阳区白水湖2福建福州马尾开发区3江西鹰潭长途汽车站附近山下4福建厦门集美5江苏南京浦口区双拢一组6江苏徐州7江苏无锡惠山区堰桥镇丁塔村8湖南怀化9湖北黄石10浙江湖州道场乡道场村

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为乙腈（A）-水（B），0～40 min乙腈由5%升到23%，40～60 min乙腈由23%升到40%，60～90 min乙腈由40%变化到23%；流速为1.0 ml・min-1；柱温为35℃；ELSD检测器，压力(3.5 bar),漂移管温度为（40℃），喷口温度为40℃；进样量为10 μl。

2.2 供试品的制备 精密称取样品粗粉粉末5.0 g，加入50%乙醇50 ml，超声处理30 min，静置后补足减失乙醇溶液的重量，滤过取续滤液40 ml；水浴挥去乙醇，用40ml蒸馏水溶解，先以醋酸乙酯萃取4次（50 ml/40 ml/40 ml/40 ml），弃去醋酸乙酯液；水液再用正丁醇萃取4次（50 ml/40 ml/40 ml/40 ml），弃去水液；水浴挥干正丁醇，残渣用20 ml蒸馏水溶解，上样于D101大孔树脂柱（8 g），用35 ml蒸馏水洗脱，弃去水液，再用50%乙醇40 ml洗脱，收集乙醇液，水浴挥干乙醇，残渣用甲醇溶解，定容至5 ml；经0.2 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 稳定性实验 取同一批次供试品溶液（样品5），分别在0，3，6，9，12，24 h测定指纹图谱，结果表明，各主要色谱峰相对保留时间和峰面积占总峰面积5%以上的峰的相对峰面积均无明显变化，其RSD分别为0.160%～1.288%和0.391%～2.892%，符合指纹图谱技术要求（RSD均在3%以内），说明供试品溶液在24 h内测定稳定性良好。