慢性ITP时脾脏的形态学及免疫组化研究(一)

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【摘要】 目的 研究ITP时脾脏的病理形态及免疫组化特点。方法 应用光镜观察36例ITP脾脏的形态特征；用免疫组化S-P法检测CD3、CD4、CD8、CD20、CD41、CD43、CD45Ro、CD68、P53和PA在ITP脾脏组织中的表达情况。结果 本组男女之比为0.19:1，男性平均年龄24.5岁，女性平均年龄32.6岁。脾脏呈轻度肿大。主要组织学改变是白髓滤泡反应性增生，生发中心扩大，滤泡周边带增宽，中央动脉壁增厚、纤维化，微血管增生。CD8+细胞多于CD4+T淋巴细胞；含血小板抗原的CD41+和CD43+淋巴细胞主要分布于生发中心；PA+淋巴细胞在红、白髓中均呈弥漫而密集分布；CD68+组织细胞数量较正常增多，T、B淋巴细胞和组织细胞呈增殖现象。 结论 ITP脾CD8+淋巴细胞明显高于CD4+淋巴细胞和T、B淋巴细胞及组织增生现象提示辅助T淋巴细胞亚群比例失调和功能异常。DEX治疗ITP能有效缓解病情。

　　【关键词】 特发性血小板减少症；脾脏；病理学；免疫组织化学

　　Chronic idiopathic thrombocytopenic purpura:a pathologic and immunohistochemical study of the spleen

　　【Abstract】 Objective To investigate the pathomorphological and immunochemical features of the spleen in idiopathic thrombocytopenic purpura. Methods Light microscopy was used to study the morphologic characteristics of 36 cases of the spleen in idiopathic thrombocytopenic purpura. The expression of CD3,CD4,CD8,CD20,CD41,CD43,CD45Ro CD68,P53 and PA protein were detected in all cases with S-P immunohistochemical method. Results The ratio of the male with female is 0.19:1. The average age of the males is 24.5 years old. The average age of the females is 32.6 years old. The splenomegaly of the chronic ITP is low-grade. The main pathologic change is reactive follicular hyperplasia of the white pulp and germinal central enlarging and broaden of the marginal zone. The thick and fibrosis walls of middle spleen arteries. The CD8+ lymphocytes >CD4+ lymphocytes. The lymphocytes which express platlate antigen CD41 and CD43 mainly distribute in the center of the folliculas area. PA positive lymphocytes located difussly and densely in red pulp and white pulp. The increasing number of cells suggests the proliferation of T and B cells and histocytes.Conclusion In ITP patients, abnormal distribution of T lymphocyte subsets and changes of the proliferation of T and B lymphocytes and histocytes may imply the dysfunction of Th1/Th2. Treatment with DEX has beneficial effect of ITP.

　　【Key words】 idiopathic thrombocytopenic purpura;spleen;pathology;immunohistochemistry

　　慢性特发性血小板减少症（CITP）是常见出血性疾病之一，发病机理与免疫异常有关，血循环中存在抗血小板抗体使血小板破坏过多，同时还作用于骨髓巨核系细胞，影响其增殖、分化及成熟过程〔1〕。本研究用免疫组化方法对破坏血小板的重要器官与场所的脾脏检测CD系列单克隆抗体的表达，以期提高对本病的认识水平。

　　1 材料与方法

　　1．1 标本来源 收集我院1996年1月～2006年6月间CITP患者行外科手术治疗脾切除标本36例；另选10例因创伤性脾破裂而手术切除的正常脾标本作对照研究。

　　1．2 方法 标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4mm厚连续切片，H.E染色，每张切片均再次经2位副高以上医师复检结果一致为最终诊断。鼠抗人P53抗体、CD系列抗体、PC NA单克隆抗体和S-P试剂盒（超敏）购自福州迈新生物 技术开发有限公司。每例标本分别标记上述抗体，DAB显色，以PBS缓冲液（0.01mol/L,pH 7.4）代替第一抗体作阴性对照；分别用已知对P53高表达的肺癌组织和对CD系列高表达的淋巴结作阳性对照。

　　2 结果

　　2．1 临床资料 共获ITP脾36例，男6例，女30例，男女之比为0.19:1，男性平均年龄24.5岁（25～65岁）；女性平均年龄32.6岁（26～50岁）。所有病例均以全身皮肤弥漫散在瘀点或瘀斑或紫癜为首发症状，育龄妇女则长期月经过多。实验室检查：血小板计数在（30～80）×109/L之间，其中1例血小板只有12×109/L。血红蛋白和红细胞计数大多减少，多呈小细胞低色素缺铁性贫血；白细胞计数正常；出血时间大多延长，而凝血时间正常；骨髓像均见巨核细胞显著增多，以颗粒性巨核细胞和裸核为主，产血小板巨核细胞少见。用酶联免疫荧光法检测血小板相关抗体：PAIgG增高33例，占91.6%；PAIgM增高8例，占22%，且常伴较严重出血；T8细胞百分值增高，而T4细胞比值下降。本组临床上均排除继发性血小板减少，诊断ITP明确。本组均因内科治疗不满意而行脾切除术，术后第5天平均应用地塞米松40mg/d左右，血小板上升维持在（60～150）×109/L。

　　2．2 形态学观察

　　2．2．1 巨检 脾脏有不同程度肿大，大小范围为（13～16cm）×（8～9cm）×（4～6cm）；重量为115～185g。表面光滑，包膜无增厚，切面脾小结明显，无出血、坏死。

　　2．2．2 镜检 主要表现为：（1）白髓滤泡反应性增生，生发中心扩大，滤泡边缘带增宽，其内见浆细胞浸润，经激素治疗后的病例滤泡呈退行性变化，数量减少，生发中心不明显，滤泡周边带无增宽，细胞数量减少；（2）脾窦扩张、淤血，红髓内可见多少不等嗜中性粒细胞浸润，部分聚集成片；（3）脾索内可见吞噬红细胞及血小板的巨噬细胞；（4）中央动脉管壁增厚、纤维化，多见年长者，并有PAS阳性物质沉着；（5）约半数病例出现轻度髓样化生；（6）微细血管密度增加；（7）红髓中组织细胞增生，可见泡沫细胞形成。

　　2．2．3 免疫表型 CD3+和CD45Ro+T淋巴细胞分布弥漫而密集；CD20+B细胞主要分布于滤泡套区和边缘区及生发中心内；CD8+T淋巴细胞明显多于CD4+T淋巴细胞（图1）； CD68+组织细胞明显多于正常对照组（图2）；含血小板抗原CD41+和CD43+淋巴细胞主要分布于生发中心；P53+淋巴细胞分布弥漫且多呈弱阳性；PA+淋巴细胞在红、白髓均呈弥漫分布。