内标法研究甘遂及其炮制品的指纹图谱(一)

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【摘要】 目的 建立甘遂饮片及其炮制品的指纹图谱。方法 采用高效液色谱法：以胡薄荷酮作为内标参照物，乙腈?水为流动相（梯度洗脱），流速 1.0 mL・min-1，检测波长235 nm，柱温30 ℃。结果 甘遂饮片及其醋制品共有17个共有峰；炮制品与生品比较，有2种成分含量增加约40%左右，1种成分含量减少达70%；17个共有峰的相似度均在0.95以上。结论 该测定方法简便，准确，重现性好，所制定的甘遂指纹图谱具有可靠性，可控制甘遂及其炮制品的内在质量。

【关键词】 甘遂　高效液相色谱法　指纹图谱　内标法

　　Abstract:Objective To establish the fingerprints of Kansui and their processed products.Methods　Pulegone was used as the internal standard. The mobile phase consisted of acetonitrile?water (gradient elution). The detection wavelength was set at 235 nm and column temperature 30 ℃．Key words: HPLC；fingerprints；internal standard method

　　甘遂为大戟科大戟属植物甘遂（Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang）的干燥块根〔1〕，主产于陕西、山西等地，本品苦寒有毒，具有泻水逐饮、破积通便之功，常用于水肿、腹水、大小便不利等症〔2〕。甘遂炮制后能降低毒性，缓和峻泻作用，因此研究出甘遂炮制前后其化学成分的变化情况，为其炮制机理研究和临床合理应用提供科学依据，同时寻找一种全面质量控制标准显得尤为重要。本试验以胡薄荷酮（pulegone）作为内标参照物，采用高效液相色谱法，对不同产地甘遂的生品及醋制品进行了指纹图谱研究。

　　1 仪器与试药

　　Waters 515高效液相色谱仪，Waters 2487 双波长紫外检测器，Millennium32数据处理系统；Kromasil C18(4.6　mm×200　mm，5 μm)色谱分析柱（大连化学物理研究所）。

　　胡薄荷酮对照品（纯度＞98%），批号：1052990，购自Aldrich Ehemical pany,Inc；乙腈（色谱醇，美国Tedia公司）；自制重蒸去离子水。

　　生甘遂饮片十批(陕西产编号0l, 02, 03，04批；山西产编号05, 06批；河南产编号07, 08批；市场统货09，10批)，醋甘遂饮片（陕西产编号Ol, 02, 03，04批；山西产编号05, 06批；河南产编号07, 08批；市场统货09，10批)，炮制品09、10批直接购自市场，其余均按炮制规范化的标准工艺炮制。药材经本院中药鉴定教研室吴启南教授鉴定为大戟科大戟属植物甘遂（Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang）的块根。甘遂药材分别购自安徽省亳州市药材总公司、无锡山禾集团靖江医药有限公司、南京中医药大学百草堂、国医堂门诊部。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　Kromasil C18(4.6　mm×200　mm，5 μm) 为色谱柱。以水为流动相A，乙腈为流动相B，进行二元梯度洗脱：0～13 min,5%～25% B；13～20 min,25%～55% B；20～30 min, 55%～60% B；30～45 min, 60%～100% B；45～85 min, 100% B。流速：1.0 mL・min-1，检测波长：235 nm，进样量：10 μL，柱温：30 ℃。

　　2.2 供试品溶液的制备

　　分别称取甘遂、醋甘遂粉末(过24目筛)约20 g，加体积分数为95%的乙醇100 mL回流提取，3次，每次2 h，滤液浓缩，真空干燥，所得浸膏用甲醇溶于25 mL容量瓶中至刻度，生品、醋制品分别加入2.5 mL、2 mL浓度为1 mg・mL-1的胡薄荷酮作为内标参照物，所得混合液用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。HPLC分析前用0.45 μｍ微孔滤膜过滤。

　　2.3 指纹图谱的方法学验证

　　2.3.1 稳定性试验 取01号甘遂按“2.2”项方法制备溶液，分别于0、2、4、8、16、24 h依法进行检测，获取指纹图谱。结果表明，各共有峰相对保留时间及相对峰面积（RSD）均＜3%。表明24 h内供试品溶液的成分稳定。