3，5-二硝基水杨酸法测定安络小皮伞菌中多糖的含量(一)

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作者：崔本连，宋海韬，齐放，王淑敏

【摘要】 目的:建立小皮伞菌中多糖含量测定方法。方法:采用3，5-二硝基水杨酸法（简称DNS法）对安络小皮伞菌多糖进行含量测定。结果:经DNS试剂显色后于500nm处测定吸光度，在此波长处溶液的吸光度与葡萄糖含量呈良好的线性关系，线性范围:0.03～0.12mg.ml，回归方程A=5.411C-0.0654，r=0.9998。平均回收率为103.76%，RSD=0.60%。结论:该方法简单易行，重复性好，能较好地控制产品质量。

【关键词】 安络小皮伞菌;3，5-二硝基水杨酸法;多糖;方药研究

　　安络小皮伞（Marasmius androsocus Tr.）为我国民间传统的药用真菌，具有止痛消炎等功能，对三叉神经痛、坐骨神经痛、面神经麻痹、偏头痛和风湿性关节炎等疗效较好。为更好的控制其质量，拟对其主要成分多糖含量的测定方法进行研究。

　　1 实验材料

　　仪器与试剂:Cary50紫外分光光度计（美国瓦里安）;葡萄糖、酒石酸甲钠、氢氧化钠、无水亚硫酸钠、苯酚、3，5-二硝基水杨酸均为分析纯;3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS）的配制:取酒石酸钾钠182g，加热水至500ml使溶解，加3，5-二硝基水杨酸6.3g，氢氧化钠21g，重蒸苯酚5g和无水亚硫酸钠5g，搅拌使溶解，冷却后加水稀释至1000ml，储于棕色瓶中，备用。

　　2 方法与结果

　　2.1 实验方法〔1-4〕

　　2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50.00mg，置50ml容量瓶中，加水适量使溶解并用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含1.00mg葡萄糖的对照品溶液。

　　2.1.2 供试品溶液的制备 单糖供试品溶液的制备:准确称取样品0.1500g，置于50ml锥形瓶中，加水40ml使溶解，离心，上清液转移至50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取3ml于50ml量瓶，滴加10%氢氧化钠溶液调至pH至9，精密加3，5-二硝基水杨酸试液2ml，混匀，置于浴中加热15min，流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

　　总糖供试品溶液的制备:准确称取等量样品，置于50ml锥形瓶中，加水40ml使溶解，离心，上清液转移至50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取3ml于50ml量瓶，加5%HCl溶液3ml，沸水溶水解30min，流水冷却至室温，滴加105氢氧化钠溶液调节pH至9，精密加3，5-二硝基水杨酸试液2ml，混匀，置水浴中加热15min，流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.1.3 测定方法 分别取单糖和总糖供试品溶液，照分光光度法〔1〕 ，以空白为参比，在550μm的波长处分别测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中单糖浓度和总糖浓度，计算，即得。用总糖量减去单糖量即为安络小皮伞菌多糖量。

　　2.2 方法学考察

　　2.2.1 测定波长的选择 精密量取对照品溶液、蒸馏水各1.5ml分别置于50ml量瓶中，分别加3，5-二硝基水杨酸试液2.0ml，于沸水浴中加热15min，流水冷却至室温，加水稀释至刻度。以显色剂-水，葡萄糖液-水，葡萄糖液-显色剂分别在波长300～800nm范围内分别进行扫描，结果最大吸收波长是370nm，但在550nm前显色剂的干扰严重，故测量波长应选550nm更合理。

　　2.2.2 反应时间考察 精密量取对照品溶液、蒸馏水各5ml分别置于50ml量瓶中，分别加3，5-二硝基水杨酸试液2.0ml（共10份），于沸水浴中分别加热1、2、3、5、8、10、15、20、25、35min，流水冷却至室温，加水稀释至刻度。以空白为参比，在波长550nm处测其不同水浴时间的吸光度，结果见表1。