高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量(一)

详细内容

【摘要】 　　目的：建立高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量。方法：采用shim?pack CLC?ODS色谱柱（6 mm×150 mm），流动相：甲醇?水?冰醋酸（45∶55∶0.5），流速1.0 mL/min，柱温40 ℃，进样量10 μL，检测波长277 nm。结果：黄芩苷在进样量0.01～0.07 mg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好，回归方程为Y=1486379X?3748（r=0.9999，n=7），平均加样回收率为103.12%，RSD为1.76%。结论：本方法快速、简便、结果准确，可用于控制该制剂的质量。

【关键词】 高效液相色谱法 小儿惊风七厘散 黄芩苷

　　〔Abstract〕 Objective:To establish an high performance chromatography (HPLC) method to assay the concentration of baicalin in Xiao?er Jingfeng Qili San. Methods: Shim?pack CLC?ODS (6 mm×150 mm) column and a mobile phase of methanol, water and glacial acetic acid (45∶55∶0.5) was used with the flow rate of 1.0 mL/min and the column temperature of 40 ℃. The detection wavelength was 277 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.01～0.07 mg/mL and the regression equation was Y=1486379X?3748 (r=0.9999, n=7). The recovery rate was 103.12% and RSD was 1.76%. Conclusions: This method is simple and aurate and able to control the quality of the preparation.

　　〔Key words〕 High performance liquid chromatography; Xiao?er Jingfeng Qili San; Baicalin

　　小儿惊风七厘散收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十一册，由牛黄、麝香、天麻、黄芩、黄连等33味中药组成，具有祛风化痰、解热镇惊的功效。临床上用于小儿外感风邪、惊风抽搐、咳吐痰涎、食滞呕吐、腹痛泄泻等症。其中黄芩苷是黄芩的有效成分，在现行质量标准中无含量测定指标〔1〕。目前为止，用高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷含量尚无报道。为了更好地控制该制剂的质量，本实验建立了高效液相色谱法测定小儿惊风七厘散中黄芩苷的含量，并经方法学考察，认为本法简便快速，结果准确，可用于该制剂质量控制。

　　1 仪器与试药

　　LC?10AD 高效液相色谱仪，SPD?10A紫外可见光检测器，CTO?10A柱温箱，C?R6A数据处理机（日本岛津公司）；CQ?250 超声波清洗器（中船总公司七二六研究所）。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110715?200514）；小儿惊风七厘散（腾冲县东方红制药厂，规格：0.2 g/瓶，批号：20060706、20070703、20071105）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为纯化水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：shim?pack CLC?ODS色谱柱（6 mm×150 mm）；流动相：甲醇?水?冰醋酸（45∶55∶0.5）〔2〕，流速1.0 mL/min；检测波长：277 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数按黄芩苷峰计算为4 156，拖尾因子为1.03。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离。

　　2.2 对照品储备液的配制

　　精密称取真空减压干燥至恒重的黄芩苷对照品10.0 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液，备用。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　取本品0.1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加50%的甲醇溶液适量，超声处理30 min，放冷，用50%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液备用。

　　2.4 阴性对照溶液的制备

　　按小儿惊风七厘散处方量和工艺制备方法制成不含黄芩的阴性样品。取阴性样品0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

　　2.5 阴性对照试验

　　按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中黄芩苷的测定。黄芩苷的保留时间为15.8 min。

　　图1 高效液相色谱图（1?黄芩苷）（略）

　　2.6 标准曲线

　　分别精密量取0.1 mg/mL的对照品储备液1、2、3、4、5、6、7 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，分别精密吸取上述溶液10 μL进样，测定峰面积，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，外标法得黄芩苷标准溶液的线性回归方程为：Y=1486379X?3748（r=0.9999，n=7），结果表明黄芩苷浓度在0.01～0.07 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

　　2.7 精密度试验

　　精密量取浓度为0.1 mg/mL的对照品储备液3 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得浓度为0.03 mg/mL对照品溶液，取上述溶液10 μL，一天内重复进样5次，测得各次峰面积分别为40410、40437、40504、40892、40632，以峰面积计算精密度，结果日内RSD为0.49%。