高效液相色谱法测定青蒿不同部位山柰素含量(一)
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【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定青蒿中山柰素的含量，并对青蒿不同部位的山柰素含量进行比较。方法岛津VP?ODS色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.2%磷酸溶液（35∶65）为流动相，测定波长367 nm，柱温30℃，流速0.8 ml/min，进样量20 μl。结果山柰素在0.0218～0.436μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率为98.70%，RSD为1.20%。结论该方法简便可行，重复性好，专属性强，可用于青蒿中山柰素的含量测定。测定结果表明，青蒿叶中山柰素的含量最高，花次之，根较少，茎最低。
【关键词】 高效液相色谱法； 青蒿； 山柰素
Abstract：ObjectiveTo establish HPLC method for the determination of kaempferol in Qinghao and analyze kaempferol content in different parts of Qinghao. MethodsKaempferol in Qinghao was determined by HPLC with VP-ODS column (150 mm×4.6 mm, 5μm). The mobile phase was Acetonitrile-0.2%H3PO4（35∶65） solution. The detection wavelength was 367nm. The column temperatare was 30℃, the flow rate was 0.8 ml/min,and the sampling volume was 20μl. ResultsLinearity of Kaempferol was good(r＝0.999 9) in range of 0.0218～0.436μg. The average recovery was 98.70%，RSD was 1.20%. ConclusionThe method is simple，aurate，repeatable and suitable for the determination of kaempferol in Qinghao. The results show that the highest content of Kaempferol is in leaf，flowers the second，less roots，stems the minimum.
Key words：HPLC; Qinghao; Kaempferol
青蒿为传统清热解暑要药，来源于菊科蒿属植物黄花蒿Artemisia annua L.的干燥地上部分〔1〕，性味苦寒，归肝、胆、肾经，具清热、祛暑、除蒸、截疟等功效，临床上主要用于治疗阴虚发热、暑热外感、疟疾、湿热黄疸诸证。青蒿药用历史悠久，全国各地均有分布。古代本草记载中除有青蒿地上部分供药用外，还有青蒿根的药用记录 〔2〕；民间验方中亦有使用青蒿根治疗多种疾病的情况。因此，青蒿这味因青蒿素而备受人们关注的药迫切需要我们的深入研究，拓展其药用价值。
青蒿的化学成分种类较多，主要含有挥发油、倍半萜内酯类、黄酮类、香豆素类等。目前，青蒿中的挥发油、青蒿素和香豆素类成分如东莨菪内酯等〔3〕均有其成分分析和含量测定的报道，但是，黄酮类成分的相关报道却未曾见过。山柰素为青蒿中黄酮类化合物之一，具有抗癌〔4〕、抗炎等药理活性，能反映青蒿的部分功效，因此，可作为一个指标成分进行分析。本文首次建立了青蒿中山柰素的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法，并对青蒿不同部位（叶、花、根、茎）的山柰素含量进行分析和比较，为青蒿药材和制剂的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
岛津（SPD-10A，LC-10AT）高效液相色谱仪；UV1100紫外－可见分光光度计。山柰素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。
青蒿药材采自四川省安岳县青蒿基地，经笔者鉴定为菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.的干燥全株。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：岛津VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈－0.2%磷酸溶液（35:65）；测定波长367 nm；流速0.8 ml/min；柱温30℃；进样量：20 μl。在该条件下，山柰素色谱峰与相邻色谱峰达到基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数（N）按山柰素峰计算为4 000以上。对照品和样品色谱图见图1。
2.2 线性范围的考察 精密称取山柰素对照品适量，加甲醇制成每毫升含山柰素0.02 mg的溶液，即得。将上述对照品溶液制成一系列不同浓度的对照品溶液，分别进样20 μl，按上述色谱条件测定其峰面积。以山柰素进样量（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，求得标准曲线的回归方程为：Y＝5 00 0 000X－98 335，R＝0.999 9。结果表明，山柰素在0.021 8～0.436 μg范围内呈良好线性关系。
2.3 供试品溶液的制备取青蒿药材粉末1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，置水浴锅中加热回流60 min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，过滤，取续滤液25 ml，加5 ml 25%盐酸，水浴回流30 min,迅速冷却至室温，移置50 ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。