银杏达莫对兔心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的影响及机制(一)
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作者：郭潇，王莉，陆艳，高雁
【摘要】 目的研究银杏达莫对兔心肌缺血再灌注损伤内皮细胞的保护作用。方法结扎兔左冠状动脉前降支制作心肌缺血再灌注损伤模型。实验兔随机分为空白对照组（假手术）、缺血再灌注组和银杏达莫组。银杏达莫组在心肌缺血前10min给予银杏达莫。观察各组缺血再灌注过程中心电图的动态改变，以及银杏达莫对血管性血友病因子及丙二醛和血清一氧化氮含量的影响。结果缺血再灌注组和银杏达莫组均造成明显的心电图动态改变，与空白对照组比较，银杏达莫组心电图ST段出现有效改变。银杏达莫组与缺血再灌注组比较血管性血友病因子活性和丙二醛水平较缺血再灌注组显著降低，而血清一氧化氮水平明显提高。结论 银杏达莫对心肌缺血再灌注损伤内皮细胞有明显的保护作用，其作用与清除氧自由基的膜脂质过氧化及扩张冠脉有关。
【关键词】 银杏达莫； 心肌缺血再灌注损伤； 内皮细胞； 心肌保护； 脂质过氧化
Abstract：Objective To study the protective effects and mechanism of Egb on endothelial cell injury induced by myocardium experienced ischemia-reperfusion in rabbits. MethodsThe model of myocardial ischemia-reperfusion injury was established by ligating the left anterior descending artery of New Zealand rabbits. Anesthetized rabbits were randomly divided into 3 groups: blank control group (n=9) in which left anterior descending coronary artery was exposed and a piece of silk thread was placed around the artery but not tied; Myocardial ischemia-reperfusion group (n=9) in which 1ml/kg normal saline was injected into vein 10 min before logation. Egb group (n=9) received intravenous inject on of Egb 10min before logation. The effect of egb on the von willebrand factor (vWF), malondialdehyde (MDA) in the plasma, the level of serum NO in injured rabbits and ECG were observed. Resultspared with blank control group or myocardial ischemia-reperfusion group, Egb group showed protection against injury as evidenced by more effective improvement in ST of ECG. Egb could evidently decrease the contects of MDA and vWF and increase serum NO as pared with ischemia-reperfusion group. ConclusionEgb has a protective effect on endordnelial injury induced by myocardial ischemia-reperfusion throngh inhibiting lipid peroxidation and increasing NO preduction.
Key words：Egb; Myocardial ischemia-reperfusion; Endothelial cells; Myocardial protection; Lipid peroxidation
冠状动脉粥样硬化所致心肌缺血病变是一种“代谢性疾病”。一些研究显示冠心病梗塞心肌相关血管再开通后，部分患者反而会因发生急性血流动力学障碍而死亡，称为心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)〔1〕。MIRI与心肌细胞密切相关，血管内皮细胞是MIRI时氧自由基，黏附因子和其他生物活性物质的来源，所以早期血管内皮细胞的结构和功能严重损伤又是构成MIRI的病理生理学基础。银杏提取物（Extract of ginkgo biloba, EGB）具有改善血液流变状态、抑制血小板聚集、抗氧化、清除自由基、缓解缺血、缺氧和舒张血管平滑肌等药理作用〔2,3〕，并且可以缩小急性心肌梗塞范围及减轻梗塞程度〔4,5〕。所以推断银杏达莫对心肌内皮有部分保护作用。本研究对在体兔心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤模型予银杏达莫干预，初步探讨其对损伤的心肌内皮细胞的保护作用。
1 材料与方法
1.1 药物和试剂
银杏达莫，由山西普德药业公司提供（批号： 国药准字H14023515）。丙二醛（Malondialdehyde, MDA） 、一氧化氮（NO）试剂盒购自南京建成生物工程研究所， 血管性血友病因子（Von willebrand factor ,vWF）试剂盒购自上海朗卡公司。
1.2 动物
健康新西兰大白兔，雌雄不限，共27只，体重（2.82±0.31）kg，由兰州生物制品研究所提供。
1.3 模型制备动物分组
1.3.1 心肌缺血再灌注损伤模型〔6〕及标本的采样
选择健康新西兰大白兔,20%乌拉坦按5 ml/kg耳缘静脉麻醉，气管插管，人工呼吸，开胸，暴露心肌，自冠状动脉左前降支(Left anterior descending coronary artery, LAD)0.5 cm处穿线环绕动脉，结扎线线自一胶管腔内引出，结扎LAD，造成急性心肌缺血,通过肉眼观察及心电图改变判断LAD结扎是否成功。LAD结扎30 min后剪开穿线使冠状动脉再通形成再灌注，再灌注30 min，从左心室取2 ml制备血浆供检测。入选标准：结扎后Ⅱ导联ST段出现弓背向上抬高，T波高耸等表现为缺血成功。剪线后，行再灌注，抬高的ST段出现下降1/2以上为再灌注成功，行再灌注60 min。
1.3.2 分组与给药
大白兔随机分为3组，每组9只。空白对照组（Ⅰ组）行假手术(Sham operated control，SC)，即在LAD0.5 cm处穿一胶管内引丝线，但不予结扎；缺血再灌注组（Ⅱ组）和银杏达莫组（Ⅲ组，缺血再灌注+银杏达莫）于结扎前10 min，Ⅱ组静注生理盐水1 ml/kg，Ⅲ组静注银杏达莫30 ml(银杏总黄酮10 mg/kg，双嘧达莫8 mg/kg)。
1.4 心电图动态变化记录
全程记录心电图变化,心电图显效标准为缺血导致抬高的ST段在再灌注60 min内恢复接近正常基线。
1.5 检测指标
采用硫代巴比妥酸（Thiobarbituric acid, TBA）法测定血浆MDA含量（nmol/ml）；血浆vWF活性由ELISH法测定其百分率；取已分离血清1 ml,由化学比色硝酸还原酶法测定血清NO含量（μmol/L）。以上实验均严格按试剂盒说明操作。
1.6 统计学处理
应用SPSS 11.5软件，实验数据采用±s表示，各组间比较采用方差分析（Analyisi of variance,ANorA)法，各组之间两两比较，采用q检验，P＜0.05为有统计学意义。