高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量(一)
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作者：南劲松 孙海涛 吴艳丽 高波
【摘要】 目的采用高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量。方法采用乙腈－0.2%磷酸溶液（4∶96）作为流动相。检测波长为260 nm，测定补血调经片中原儿茶酸的含量。结果标准曲线线性范围为0.0165～0.165 μg，r=0.999 99；平均回收率为99.56%，RSD%＝0.39%。结论该实验方法线性关系良好、简便、准确、专属性强，可作为补血调经片控制原药材和药品的质量方法。
【关键词】 补血调经片； 高效液相色谱法； 原儿茶酸
Abstract：ObjectiveTo establish a quality control method of Buxue Tiaojing Tablets.MethodsThe HPLC system of a Alltima HP C18（4.6 mm ID×250mm, 5 μm） was used and a mixture of acetonitrile-2% phosphoric acid (95∶5, volume ratio) as the mobile phase. The detection wavelength of Protoca-technic acid was 260 nm. ResultsProtocatechuic acid showed good linearity (r=0.999 99) within the range of 0.0165～0.165 μg. The average recovery was 99.56%, RSD% was 0.39%. ConclusionThe method is simple, aurate and exclusive and it can be used for the quality control of Buxue Tiaojing Tablets.
Key words：Buxue Tiaojing Tablets; HPLC; Protocatechuic acid
补血调经片是由鸡血藤、阿胶、岗稔子、肉桂、党参等18味中药组成，具有补血理气、调经的功效，用于妇女贫血、面色萎黄、赤白带下、经痛、经漏、闭经等症。其处方组成比较复杂，鸡血藤为方中君药，其功能主治为补血，活血，通络。用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛。与该产品的功能主治密切相关，本实验以其所含有效成分之一原儿茶酸为指标，采用高效液相法测定方中的原儿茶酸的含量。
1 仪器与试药
岛津LC-20A高效液相色谱仪；SPD-M20A二极管阵列检测器；岛津UV-2550紫外分光光度计；Mettler PB303-N 电子分析天平（准确度：1 mg）；Mettler AE-160电子分析天平（准确：0.1 mg；Mettler AG-135电子分析天平（准确度：0.01 mg）；HS10260D型超声清洗器。原儿茶酸对照品（批号：110809－200102）由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为优级纯，水为超纯水。
2 方法与结果〔1～3〕
2.1 测定波长的选择用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在260 nm波长处具有最大吸收。故选择260 nm作为测定波长。
2.2 对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加50%甲醇溶液制成每毫升含16 μg的溶液，即得。
2.3 样品提取方法的考察
2.3.1 醋酸乙酯提取法 精密称取本品2 g，加入0.2%盐酸1 ml湿润，加入醋酸乙酯50 ml，称定重量，超声提取（250 W，40 kHz）25 min，放置至室温，加醋酸乙酯补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液25 ml，蒸干，残渣加50％甲醇溶解，定量转移至25 ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 甲醇溶液提取法 精密称取本品2 g，加入50%甲醇溶液50 ml，称定重量，超声提取（250 W，40 kHz）30 min，放置至室温，加50%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。
结果，醋酸乙酯提取法提取产物较甲醇提取法所提的产物的色谱峰分离清晰，用二极管阵列检测器检测，醋酸乙酯提取法所提产物的峰纯度高，三点法相似度在0.999以上，故采用选择方法醋酸乙酯提取法。
2.4 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，精密称取2 g，按“2.3.1”方法提取原儿茶酸提取液样品。
2.5 色谱条件色谱柱为Alltima HP C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈－0.2%磷酸（4 : 96）；柱温40℃；流速0.7 ml/min；测定波长260 nm。进样量10 μl。对照品、供试品溶液与鸡血藤药材提取液的色谱图如图1～3。
供试品溶液理论踏板数为14 601，结合本法具体情况，暂定其理论板数按原儿茶酸峰计算，应不得低于5 000。
2.6 阴性对照实验为进一步考察实验设计的合理性，按原处方工艺制成不含鸡血藤的阴性对照样品，按“2.5”项下方法测定，阴性对照样品如图 4。由图4可以看出阴性对照色谱中，原儿茶酸峰位置无干扰峰，证明本法是合理可行的。