大孔吸附树脂分离纯化黄芩中黄芩苷的工艺研究(一)

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作者：宣寒， 陈钧， 杜丰玉， 任晓锋， 陈红斌

【关键词】 黄芩苷；,,大孔吸附树脂；,,纯化

　　摘要：目的利用AB8大孔吸附树脂纯化黄芩中黄芩苷,确定树脂纯化黄芩苷的工艺参数。方法以黄芩苷吸附量为指标,并通过正交实验考察确定了该树脂分离纯化黄芩苷的工艺条件。结果AB8 型树脂对黄芩苷有良好吸附分离性能,其吸附分离黄芩苷的工艺条件为:上样浓度为50 mg/ml（生药量）,上样液PH值为4，吸附流速为4BV/h ,上样体积为6BV，洗脱剂为5倍量树脂柱体积50％乙醇且洗脱剂的pH值为8。结论AB8 型大孔吸附树脂在所确定的工艺条件下,纯化黄芩苷效果良好,黄芩苷纯度可达90%左右。

　　关键词：黄芩苷； 大孔吸附树脂； 纯化

　　Research on the Purification of Baicalin of Scutellaria baicalensis Gei.by AB8 Macroporous Resin

　　Abstract：ObjectiveTo set up the method for purification of baicalin from Scutellaria baicalensis Gei.by AB8 macroporous resin . MethodsThe process technology for purification of baicalin with AB8 macroporous resin was selected by dynamic absorption ratio through orthogonal tests.ResultsThe AB 8 macroporous resin owned optimum absorption and elution ability.The optimum absorption conditions were the sample concentration of 50 mg ?ml1 , the PH of sample at 4, the current velocity of 4BV ?h1 , of eluant of 50 % ethanol（5BV）and the pH of eluting reagent at 8 .ConclusionThe AB 8 macroporous resin can be used to purify baicalin suessfully , the purity of baicalin is about 90 %.

　　Key words：Baicalin; Macroporous resin; Purification

　　黄芩是唇形科植物Scutellaria baicalensis Ge.的干燥根, 其性寒味苦, 具有清热燥湿、泻火解毒的功效, 它的主要有效成分黄芩苷(baicalin) 具有抑菌、清热、降压、镇静、抗炎、解毒等作用〔1〕。大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的新型吸附剂，是继离子交换树脂之后又一新兴的介质。近年来已广泛应用于天然植物中活性成分,如皂苷、黄酮、内酯、生物碱等大分子化合物的提取分离〔2〕。本实验主要对AB8大孔吸附树脂纯化黄芩苷的工艺进行研究。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器JASCOLC1500高效液相色谱仪；JASCOW1575紫外检测器；Buchi R200型旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；METTLER AE240分析天平(上海梅特勒托利多仪器有限公司)；紫外可见分光光度计；THZC摇床(江苏太仓市华美生化仪器厂)；Sartorius BP2112D 型电子天平(德国赛多利斯公司)；BU G25212 型超声波清洗机。

　　1.2 试药 黄芩药材(购自江苏江扬国药有限公司)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供)；树脂AB8、S8、NKA9 (南开大学化工厂)；高效液相用甲醇为色谱纯；高纯水；其它试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 含量测定

　　2.1.1 紫外分光光度法精密称取黄芩苷对照品4.96 mg，用70％乙醇定容至10 ml,摇匀，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 ml于10 ml容量瓶中，再用70％乙醇定容至刻度，以70％乙醇为空白，于278 nm处测定吸光度〔3〕。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：A＝70.396C＋0.021 7，r＝0.999 3（n=5），线性范围为2.48～12.4 μg/ml。样品测定后按此回归方程计算。

　　2.1.2 高效液相色谱法 色谱条件：色谱柱为sinochrom(C18 ,250 mm ×4.6 mm ,5 μm) ;柱温40.0℃;流速0.8 ml/min;流动相为甲醇∶0.2％磷酸水溶液(50∶50) ;测定波长280 nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2 500〔3〕。标准曲线的制备：精密称取黄芩苷对照品3.18 mg, 加甲醇定容至10 ml,摇匀，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0 ml至10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μl，测定峰面积。以峰面积对进样量回归，得回归方程：Y=3 541 229.41X + 29 261.55，r=0.999 9(n=5)，线性范围为0.063 6～1.272 μg。样品测定后按此回归方程计算。

　　2.1.3 上柱液的制备 称取黄芩粗粉（20目）,分别加10倍量和8倍量水回流提取2 次,1.5 h/次,提取液滤过,合并,部分浓缩,加浓盐酸调pH为1，80℃保温30 min，静置，离心20 min (5 000 r/min) ，取沉淀加适量纯化水，加40%氢氧化钠调pH为6，抽滤, 加水定容到一定体积,即得上柱液。

　　2.2 大孔吸附树脂选择

　　2.2.1 大孔吸附树脂的预处理乙醇湿法装柱,用乙醇在柱上流动清洗,不时检查流出的乙醇液,至乙醇液与水混合(1 ∶5) 不呈白色浑浊为止,然后以大量蒸馏水洗去乙醇至无醇味。

　　2.2.2 静态吸附量考察分别精密称取预处理过的大孔吸附树脂NKA9 , S8 ,AB8 各1 g（湿重）置于100 ml锥形瓶中,分别加入10 ml黄芩提取溶液(含生药量100 mg?ml1) ,室温下置摇床中于60 r/min下振摇24 h，使之充分吸附，取上清液测定其中总黄酮的含量，计算各树脂的静态吸附量,结果见表1。静态吸附量(mg/g)=(上样液浓度- 吸附剩余液浓度)×上样液体积/树脂质量

　　2.2.3 静态解吸量考察取2.2.1项下已吸附过的树脂，分别加入70%乙醇20 ml，室温下置摇床中于60 r/min下振摇24 h，使之充分解吸，取上清液测定其中总黄酮的含量，计算各树脂的静态解吸量,并根据静态吸附量计算解吸率。结果见表1。静态解吸量(mg/g)=(洗脱液浓度×洗脱液体积)/树脂质量解吸率=静态解吸量/静态吸附量×100%综合以上实验,表明3种树脂中AB8型大孔树脂对总黄酮吸附量虽然不是最大,但是解吸率最高, 因此选用AB8树脂对黄芩提取液中黄芩苷进行纯化。

　　表1 不同类型的大孔吸附树脂对黄芩苷吸附效果的影响（略）

　　2.2.4 大孔吸附树脂AB8吸附动力学实验取经过预处理过的AB8大孔吸附树脂1.00 g（湿重），置锥形瓶中，加入20 ml黄芩提取液和20 ml蒸馏水，在30℃下于摇床中振摇24 h，使之充分吸附，根据吸附前后溶液中各成分浓度的差值，计算出吸附量。测定树脂在 t 时刻 ( t = 0.5 ,1，2 ,3 ……6 h)吸附量 (mg/ g) ,得吸附动力学曲线〔4〕。结果见图1。

　　图1 AB8树脂的吸附动力学曲线（略）

　　如图1可知：AB8树脂对黄芩苷的吸附，起始阶段吸附速率较大且两小时达到平衡，属于单分子层吸附。快速吸附在工业上是很有利的，可缩短生产周期。