水芹提取物对小鼠学习记忆促进作用的影响(一)

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作者：张红英 张顺兴 秦孝智

【关键词】 水芹；,,学习记忆；,,回避反应；,,超氧化物歧化酶；,,丙二醛；,,小鼠

　　摘要：目的：研究探讨水芹提取物对小鼠学习记忆及超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响。方法：采用跳台和避暗法及测定 SOD活性、MDA含量的方法，观察水芹提取物对小鼠学习记忆以及 SOD活性、MDA含量的影响。结果：水芹提取物可明显改善东莨菪碱、氯霉素、乙醇3种化学药物所致记忆障碍，亦可提高红细胞中 SOD活性，降低肝脏组织中 MDA含量。结论：水芹提取物具有一定改善学习记忆的作用，其作用可能与提高 SOD活性，降低 MDA的含量有关。

　　关键词：水芹； 学习记忆； 回避反应； 超氧化物歧化酶； 丙二醛； 小鼠

水芹为伞形科植物，全草性味甘辛、凉，功能清热利水〔1〕。主治黄疸性肝炎，水肿〔2〕，对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用〔3〕，并有抗脂质过氧化作用〔4〕，该实验进一步探讨了水芹提取物（以下简称 Sf- E）对小鼠学习记忆及超氧化物歧酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的影响。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物

　　昆明种小鼠，体重（21±2）g，雌雄兼用，由延边大学医学部实验动物科供应，合格证号（10-1022），训练前在实验室适应环境1 d以上。

　　1.2 药品与试剂水芹 Oenanthe Stolonifera(Roxb)Wall.exDC，采集于吉林省汪清县百草沟，经延边大学药学院刘永镇教授鉴定为正品。水芹乙醇提取物：根、茎，用乙醇浸泡3次,温度为40℃， 12 h/次，合并3次滤液，用旋转蒸发器减压浓缩，提取后备用。其他试剂均为国产分析纯。

　　1.3 仪器 GB-204电子秤，722分光度计（上海精密科学仪器有限公司制造）。

　　.4 统计学处理　

　　应用 SPSS 10.0软件进行数据分析。

　　2 方法

　　2.1 实验分组

　　2.1.1 学习记忆实验分为5组,每组10只。即空白对照组，东莨胆碱模型组，脑复康阳性组，Sf- E（10，5 g/kg）药物组。连续 ig 9 d。

　　2.1.2 SOD活性和 MDA含量测定取小鼠30只，随机分为对照组，Sf-E（10 g/kg）组和 Sf-E（5 g/kg）组，每组10只。连续ig 25 d，1次/d。末次给药1 h后取血，测定SOD的活性〔7〕和 MDA的含量〔7〕。

　　2.2 行为实验模型 采用一次性被动回避反应 （One tria passive avoidance responcse）-跳台法和避暗法〔5〕。

　　2.2.1 跳台法 实验装置为小鼠跳台反应箱，体积为30 cm×12 cm×30 cm，分为3室，底面为可通电的铜栅。训练时置小鼠于反应箱内适应3 min，然后通以36 V连续电刺激5 min，小鼠受到电击后的正常逃避反应为跳上橡皮台（安全区）。记录5 min内动物跳下橡皮台的次数作为训练期错误次数。24h后在底部铜栅通电的情况下，依前法将动物轻置于橡皮台上，记录3 min内的电击次数作为测验期错误次数，为主要观察指标。

　　2.2.2 避暗法 小鼠避暗箱大小为36 cm×12 cm×12 cm，分为前部明室和后部暗室两部分，两室间有直径3 cm 的空洞相通。底部为铜栅，后半部暗室通以40 V电压。训练时将小鼠背对洞口放入明室。开始计时，从小鼠放入至钻进暗室触电的时间，为训练时潜伏期，同时观察小鼠5 min内进入暗室的次数。24 h后进行测验，记录每只小鼠第1次进入暗室的潜伏期和5 min内进入暗室的次数。

　　2.3 红细胞中 SOD活性的测定 取小鼠血50 μl放入（50 u肝素）刻度试管内，2 000 r/min，离心3 min，用玻璃吸管吸取上清液，然后加入双蒸水0.2 ml混匀,再加入95％乙醇0.1 ml振荡30 s，加入三氯甲烷0.1 ml 置旋涡混匀器，抽提1 min ,3 000 r/min ，离心3 min，上层为 SOD抽提液，中层为血红蛋白沉淀物，下层为三氯甲烷，记录上层液体，取10 μl做 SOD活力测定〔7〕。

　　2.4 肝脏组织中 MDA含量的测定取5％肝组织匀浆液0.2 ml，加入8.1％十二烷基硫酸钠（SDS）0.2 ml， pH3.5的20％醋酸1.5 ml。0.8％TBA1.5 ml,加双蒸水至4.0 ml，置95℃水浴箱加热1 h，自来水冷却后再加蒸馏水1.0 ml, 然后加入正丁醇-吡啶（15：1 ,v/v）混合溶剂5.0 ml．振荡1 min，离心取上层有机液相，于532 nm波长测定吸收度。计算组织中 MDA含量（F:TEP标准应用液的吸收度， f:样本的吸收度）。