黄连消渴颗粒提取工艺改进的研究(一)
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作者：邓月婷 马超英 陈陆 蒋合众 李燕
【摘要】 目的改进黄连消渴颗粒的提取工艺。方法分别以盐酸小檗碱和多糖的含量为指标，采用正交设计法和单因素比较法，设计优选了黄连消渴颗粒剂的提取工艺。结果优选出的提取工艺为：黄连与原方中其余四味药分开提取；黄连粗粉浸泡30 min后，用12，10倍量水提取2次，提取时间均为1.5 h；其余4味药一起提取，浸泡30 min，加10倍量水提取1次，提取时间为1.5 h。 结论该实验确定的提取工艺方法合理，稳定可行。
【关键词】 盐酸小檗碱 多糖 提取工艺
Abstract：ObjectiveTo improve the extraction technology of Huang-lian-xiao-ke Granule. MethodsThe extraction technology for Huang-lian-xiao-ke Granule was optimized through single parative and orthogonal law with the use of the extraction rate of berberine hydrochloride and polysaharide as the assessment index. ResultsThe optimized extraction technology for Huang-lian-xiao-ke Granule was as follows: Copis chinensis Franch. and the other four kinds of raw materials in the origin prescription were decocted separately; after soaked for 30min, the coarse powder of Copis chinensis Franch was decocted with 12,10 times water each time and both for 1.5h; after soaked for 30min, the four kinds of raw materials were decocted together for 1.5h just one time with 10 times water. ConclusionThe extraction technology is reasonable, stable and easy to operate.
Key words：Berberine hydrochloride； Polysaharide； Extraction technology
黄连消渴颗粒是本课题组在研的一个六类中药新药，由黄连、黄芪、山药等5味药组成，具有清热润燥、益气养阴、生津止渴等功效，临床上主要用于治疗消渴(2型糖尿病)〔1〕。为了充分提取有效成分，提高疗效，同时也为制成固体制剂提供实验依据，本文对其提取工艺进行了研究。因方中降血糖的主要成分为盐酸小檗碱和多糖，根据其性质及该方的临床应用，故初步确定君药黄连与其余4味药分开提取，均用水提。
1 仪器与材料
以上5味药材均购于四川峨眉仙山中药科技发展有限公司。黄连Copis chinensis Franch.为川产味连，黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao为蒙古黄芪，山药Dioscorea opposita Thunb.为怀山药，其他药材均为主产地优质药材，经西南交通大学中药研究所鉴定均为正品。无水葡萄糖对照品由中国药品生物制品检验所提供，批号：110833-200302；盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检验所提供，批号：110713-200208；乙腈、乙醇、磷酸二氢钾均为色谱纯，浓硫酸、苯酚为分析纯；岛津UV300紫外分光光度计；岛津LC-20AT高效液相色谱仪。
2 方法与结果
2.1 黄连提取工艺的考察
2.1.1 正交实验设计 根据预试结果，以提取时间、料液比、提取次数为3因素，每个因素3个水平，进行L9（34）正交实验。因素水平设计表见表1。
2.1.2 正交实验方法与结果称取9份黄连粗粉，每份12 g，按照表1所列因素和水平，加水浸泡30 min后回流提取，趁热抽滤，将提取液定容至500 ml。精密量取以上提取液2 ml，用无水乙醇定容至10 ml。离心，取上清液1 ml，再用无水乙醇定容至10 ml，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。按照“2.1.3”项下方法测定盐酸小檗碱的含量。结果见表2。
表1 因素水平表（略）
表2 正交实验结果（略）
由正交实验结果可知，影响提取效果的因素顺序为：C（提取次数）＞A（提取时间）＞B（料液比）。极差结果为A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，直观分析确定最佳提取工艺为：A3B3C3。鉴于提取次数（C）的拐点在C2，考虑实际生产成本，可将提取时间（C）由3次调整为2次。综合考虑，将工艺优化为A3B3C2，即：黄连粗粉浸泡30 min后，用12，10倍量水提取2次，提取时间分别为1.5 h。
2.1.3 盐酸小檗碱的含量测定色谱条件：色谱柱为Waters Symmetry ShieldTM RP18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（30∶70）；流速0.8 ml/min；检测波长345 nm；柱温25℃；进样量10 μl。
对照品溶液的制备及标准曲线的绘制：精密称取盐酸小檗碱对照品5.0 mg，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1 ml，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，配成50 μg/ml的对照品溶液，0.45 μm微孔滤膜过滤。分别精密吸取对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=4 936 700.000 0X－40 780.000 0，r=0.999 9，进样量在0.10～0.50 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
样品的测定：分别取上述9份供试液10.0 μl进样，以与对照品相同的方法测定其峰面积，根据回归方程计算小檗碱的含量，并由此推算出各因素水平下提取液中盐酸小檗碱含量。