血必净联合前列腺素E1应用对肺纤维化大鼠羟辅氨酸的影响(一)

详细内容

【摘要】 目的探讨血必净注射液联合前列腺素E1（PGE1）注射液对实验性急性肺间质纤维化大鼠的羟脯氨酸(HYP)的影响。方法采用一次性气管内注射博来霉素（BLM）的方法复制大鼠肺间质纤维化模型，将大鼠随机分为6组，待处死后，行免疫组化染色方法，测定HYP水平。结果血必净联合PGE1在第7天、第14天、第28天与其他非对照组比较明显抑制HYP的生成 (P0.05或P0.01)。第28天血必净组及PGE1组HYP含量均小于激素组（P0.05）。结论血必净联合PGE1联合应用能有效抑制实验性肺纤维化大鼠HYP的水平。

【关键词】 肺间质纤维化 血必净 前列腺素E1 羟脯氨酸

　肺间质纤维化（pulmonary interstitial fibrosis，PIF）是指多种原因导致的，以成纤维细胞增殖和大量细胞外基质积聚为其病理特征的进行性间质性疾病。临床表现主要为进行性呼吸困难和低氧血症等，最终表现为呼吸衰竭。PIF的平均生存时间少于3年，5年生存率为30%～50%〔1〕。基于对PIF的认识，我们提出了血必净联合PGE1治疗的方案，并力求通过本实验验证其对HYP的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料Wistar大鼠108只，雌雄各半，体重（203.5±6.0）g，由军事医学科学院第四研究所提供，实验动物饲养于天津中医药大学实验动物中心。盐酸博莱霉素：天津太河制药有限公司生产。注射用甲泼尼龙琥珀酸钠（甲强龙），法玛西亚普强（中国）有限公司生产。血必净注射液（0.5 g生药/ml），天津红日药业有限公司生产，外观为棕黄色透明液体，规格10 ml/支，批准文号，国药准字Z2004033，国家二类新药，中药保密品种。PGE1注射液，北京泰德制药有限公司生产。大鼠羟脯氨酸试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 模型制备采用一次性气管内注射BLM的方法制备急性肺纤维化动物模型，将大鼠用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后固定，抬高鼠板头端，使与桌面成30～35°。颈部备皮消毒，无菌操作下作长约1 cm的颈中切口，逐层分离暴露气管，并用弯尖眼科钳经气管下方穿过，轻微抬起气管，但不影响气道通气。在直视下用1 ml注射器穿刺两软骨环间，保持针头与气道方向相同，并尽可能在气道中央，快速向气管内注入BLM溶液(BLM 8 mg+生理盐水1.6 ml)1 ml/kg。注射后立即拔出针头，将动物直立并左右旋转，使药液在肺内均匀分布，缝合皮肤，手术过程严格无菌操作。其中正常对照组(假手术组)大鼠以等容量生理盐水(NS)注入气管代之。

1.3 动物分组及给药方法将108只大鼠随机分为6组,按体表面积法换算动物给药剂量：正常对照组（Ⅰ组），18只，假手术后第2天开始腹腔注射生理盐水1 ml，1次/d；模型对照组（Ⅱ组），18只，手术后第2天开始腹腔注射生理盐水1 ml，1次/d；血必净组（Ⅲ组），18只，手术后第2天开始腹腔注射血必净4.5 ml/kg，1次/d；甲强龙组（Ⅳ组），18只，手术后第2天开始腹腔注射甲强龙4.5 mg/kg，1次/d；PGE1组（Ⅴ组），18只，手术后第2天开始腹腔注射PGE12 μg/kg，1次/d；中西医结合组（Ⅵ组），18只，手术后第2天开始腹腔注射血必净4.5 ml/kg和PGE1 2 μg/kg，1次/d。各给药剂量均相当于成人给药量，各组手术后第7天、14天、28天分3批各处死6只。

1.4 检测指标将大鼠用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后固定，腹主动脉放血处死〔2〕，测定肺组织羟脯氨酸含量。称取1 g肺组织，剪碎，加入9 ml冷生理盐水匀浆，留取上清液待测，按照试剂盒说明步骤进行羟脯氨酸的测定。

1.5 统计学方法采用SPSS11.5统计软件，计量资料数据用±s表示，采用单因素方差分析，组间比较采用q检验，P0.05认为统计学上差异有显著性，P0.01认为统计学上差异有高度显著性。

2 结果

各组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量的变化见表1。表1 各组肺组织羟脯氨酸含量比较

3 讨论

PIF是一类多种病因引起的而表现相似的异质性疾病，是多种播散性肺间质性疾病的共同病理改变，是对损伤的过度修复。其主要病理特点是早期的播散性肺泡炎和后期大量成纤维细胞的病理性增生及基质胶原进行性积聚并取代正常的肺组织结构。

目前认为PIF的主要发病机制之一是复杂的细胞因子网络调控失衡导致胶原代谢失衡，进而致胶原异常沉积，主要影响因素有：控制胶原产生的细胞数量和类型的变化；肺内纤维蛋白(原)沉积增加等等。在肺间质中，胶原主要是I型、Ⅲ型和V型。PIF病人中I型胶原（主要由成纤维细胞产生）显著增加（I型与Ⅲ型胶原比例失调，最终导致胶原沉积），这是纤维化的重要标志。