地黄不同炮制品补血作用研究(一)

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作者：崔榱，房晓娜，王会霞，李军

【摘要】 　　目的观察地黄的3个炮制品对血虚小鼠的补血作用。方法应用环磷酰胺腹腔注射和综合放血造成小鼠血虚模型，观察地黄不同炮制品对血虚小鼠外周血象、CFU-E、BFU-E和CFU-GM的影响。结果与酒炖熟地组相比，生地组明显增强血虚小鼠骨髓粒系祖细胞的生成能力，并能升高外周血白细胞数；其他各组相比，酒炖熟地组显著增强血虚小鼠骨髓红系祖细胞的生成能力。结论不同地黄炮制品对血虚小鼠补血作用是通过不同的机制实现的。

【关键词】 生地黄； 清蒸熟地； 酒炖熟地； 血虚； 补血

　　Abstract：ObjectiveTo study the effects of three different processed products of Dihuang on blood deficiency of mice. Methods The blood deficient models in mice were induced by intraperitoneal injection of cyclophosphamide or by limiting diet and chronic bleeding . Three different processed products of Dihuang were used in treating the models and the effects on the peripheral blood of the mice of blood deficiency and on the CFU-E，BFU-E and CFU-GM were observed. ResultsRadix Rehmanniae enhanced capacity of proliferation of granulocyte progenitor cell and increased the total numbers of WBC; Radix Rehmanniae praepared by yellow wine stewing enhanced capacity of proliferation of erythroid progenitor cell.ConclusionThe different processed products of Radix Rehmanniae can enrich the blood by different mechanism.

　　Key words：Radix Rehmanniae; Prepared rhizome of rehmannia by steam; Radix Rehmanniae prapared by yellow wine stewing; Blood deficiency; Enrich the blood

　　地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch. 的块根〔1〕，始载于《神农本草经》，被列为上品。历代本草均有记载，为常用中药之一。由于炮制方法的不同，有鲜地黄、生地黄及熟地黄等不同品种。生地黄性寒，具有清热凉血、养阴生津的功效，制后可使药性由寒转温，味由苦变甘，功效由清转补，具有补血滋阴、益精填髓功效。其制法有加酒、不加酒等。传统观点认为，蒸制后可使药性由寒转温，味由苦转甜，功能由清转补；酒制后且可借酒力行散，起到行药势，通血脉，更利于补血，使地黄补而不腻。药理研究表明熟地黄有一定程度的补血作用〔1〕，但地黄不同炮制品补血作用的比较研究尚未见报道，因此我们开展了以下研究。

　　1 器材

　　1.1 药物地黄选用河南温县产道地药材玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的干燥根。生地（河南省焦作市武陟县永盛药材加工厂怀药种植基地提供）、清蒸熟地、酒炖熟地（河南省焦作市武陟县永盛药材加工厂提供），经河南中医学院中药标本馆刘若庸教授鉴定。生地、清蒸熟地、酒炖熟地，经水煎、过滤、浓缩至1∶1， 4℃备用。按《中药药理研究方法学》〔2〕计算小鼠的等效剂量为4.5 g・kg－1・d－1 。

　　1.2 仪器和试剂全自动血球计数仪，日本Sysmex-820；CO2培养箱，Napco-5410；光学显微镜，Nipon产品；定量取血管，北京红星区医疗设备厂产品；环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号050108；马血清，北京元亨圣马生物技术研究所产品，批号050529；Epo，南京华欣药业产品，批号20010303；C6，杭州九源产品。

　　1.3 动物昆明种小鼠，体重为（20±2）g，购自军事医学科学院动物实验中心，动物合格证号2005－011。二级动物饲养室饲养。

　　2 方法

　　2.1 地黄不同炮制品对环磷酰胺所致血虚小鼠补血作用的比较研究

　　2.1.1 动物分组及模型制备 昆明种小鼠常规饲养数天适应环境后，按体重随机分组：正常对照组、模型对照组、生地组、清蒸熟地组、酒炖熟地组。除正常对照组外，其余各组于实验第1天按250 mg/kg剂量一次腹腔注射环磷酰胺〔3〕，制成贫血模型小鼠。各给药组分别灌胃相应的药物，给药量为9.0 g・kg-1・d-1，1次/d，每次0.2 ml/10 g，连续10 d，正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水。

　　2.1.2 检测指标

　　外周血象的检测：在造模前，造模后1，3，5，7，9，12，15，18 d不同检测时间点，每只实验小鼠尾静脉取血20 μl，用Sysmex-820全自动血球计数仪检测外周血象。

　　造血祖细胞的培养：造模后第10天，每组处死3只小鼠，按文献方法〔4〕进行集落培养，计算细胞集落数，以此反映小鼠骨髓CFU-E，BFU-E和CFU-GM的生成能力。

　　2.2 地黄不同炮制品对综合放血法所致血虚小鼠补血作用的比较研究

　　2.2.1 动物分组及模型制备 昆明种小鼠，常规饲养数天适应环境后，按体重随机分为：正常对照组、模型对照组、生地组、清蒸熟地组、酒炖熟地组。除正常对照组外，其余各组小鼠隔2 d放血0.4 ml，每天按100 g・kg-1・d-1体重限食〔5〕，在第15天停止造模，观察9 d结束。各给药组于造模第1天给予相应的药物，给药量为9.0 g・kg-1・d-1，1次/d，每次0.2 ml/10g，正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水，连续15 d。

　　2.2.2 检测指标

　　外周血象的检测：在造模前，造模后3，6，9，12，15，18 d不同检测时间点，每只实验小鼠尾静脉取血20 μl，用Sysmex-820全自动血球计数仪检测外周血象。

　　造血祖细胞的培养：造模后第10天，每组处死3只小鼠，按文献〔4〕方法进行集落培养，计算细胞集落数，以此反映小鼠骨髓CFU-E，BFU-E和CFU-GM的生成能力。

　　3 结果

　　3.1 地黄不同炮制品对环磷酰胺所致血虚小鼠补血作用的比较研究

　　3.1.1 地黄不同炮制品对环磷酰胺所致血虚小鼠外周血象的影响结果表明，环磷酰胺一次腹腔注射造模后，模型对照组外周白细胞在制模3 d后降至最低点，然后短暂回升后又稍下降，一直显著低于正常对照组。生地在第9天显著升高外周血白细胞（P＜0.01），清蒸熟地在第3，7天显著升高白细胞（P＜0.05），且与酒炖熟地有显著差异。清蒸熟地、酒炖熟地在18 d能显著升高外周血红细胞数（P＜0.01），且显著高于生地。见表1～2。