产ESBLs大肠埃希菌的耐药表型及水平传播研究(一)

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【摘要】 目的 了解昆明市第一人民医院临床分离的大肠埃希菌超广谱β?内酰胺酶(extended spectrum β?lactamases，ESBLs)的耐药表型和水平传播情况。方法 对2005年1月～12月昆明市第一人民医院临床分离的197株大肠埃希菌用表型确证试验检测ESBLs，用Kirby?Bauer琼脂扩散法做药物敏感试验；用接合试验了解产ESBLs基因是否定位于质粒，并对接合子进行KB法药敏试验和ESBLs表型确证。结果 197株大肠埃希菌中共检出产ESBLs菌104株，检出率52.79%。在各类标本中产ESBLs菌株在纤维支气管镜(bronchofibroscope，BF)刷片中分离率最高(75%)，就科别来看内分泌科标本的产ESBLs大肠埃希菌的分离率最高(78.57%)。除亚胺培南和阿米卡星外，产ESBLs菌株对其他15种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株(P0.01)。104株产ESBLs菌株中有91株符合供体菌的标准，64株接合成功，接合子均确证产ESBLs，其接合率为70.33%。64株供体菌及其相应接合子的药敏结果显示除复方磺胺甲口恶唑、左氧氟沙星、庆大霉素、头孢吡肟和头孢西丁外，供体菌及其接合子对其他12种药物耐药率无显著性差异(P>0.05)。结论 昆明市第一人民医院大肠埃希菌产ESBLs和耐药质粒水平传播情况严重，临床应加强对大肠埃希菌耐药性的监测，严格掌握抗生素的使用指征，防止耐药菌株的传播流行。

【关键词】 大肠埃希菌； 超广谱β?内酰胺酶； 耐药； 接合实验

大肠埃希菌是临床分离的革兰阴性杆菌中最常见的菌种，它作为重要的条件致病菌广泛存在于自然界，由于临床广谱抗生素特别是第三代头孢菌素抗生素的大量使用，菌类在选择性压力下不断发展其耐药机制，产生超广谱β?内酰胺酶已成为重要的耐药机制之一，给临床治疗带来很大的困难。本研究收集2005年1月～12月我院临床标本中分离的197株大肠埃希菌，通过表型确证试验、药物敏感试验和接合试验，了解本地区大肠埃希菌产ESBLs发生率、产ESBLs菌株的药敏情况以及产ESBLs大肠埃希菌耐药性在同种菌中的水平传播情况，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 菌株及鉴定

收集2005年1月～12月昆明市第一人民医院住院及门诊感染患者送检的各类标本中分离得到的大肠埃希菌197株，排除同一患者同一部位重复分离的菌株。其中来自尿液标本96株(48.73%)、痰液标本68株(34.51%)、血液标本11株(5.58%)、BF刷片8株(4.06%)、伤口分泌物5株(2.54%)、脓液3株(1.53%)、其它标本6株(3.05%)。标本来自呼吸科40例、门诊29例、消化内科18例、重症监护室(ICU)17例、内分泌科14例、泌尿外科14例、干部科12例、肿瘤科11例、中医科9例、神经外科8例、儿科6例、神经内科4例、骨科2例、其他科室13例。全部菌株按照《全国临床检验操作规程》第二版常规培养分离。菌株采用BD BBL Crystal ENF鉴定系统鉴定到种。

1.2 质控菌株及受体菌

质控菌为大肠埃希菌AT35922(敏感株)和大肠埃希菌AT35218(产β?内酰胺酶株)。受体菌为利福平耐药的大肠埃希菌C600(北京协和医院检验科惠赠)。

1.3 培养基、抗菌药物纸片和试验用药

法国Bio?Merieux公司Mueller?Hinton琼脂；英国Oxoid生产的药敏纸片， 分别为阿米卡星、 阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、复方磺胺甲口恶唑、左氧氟沙星、哌拉西林、庆大霉素、亚胺培南、头孢吡肟、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁、头孢唑林、头孢噻肟/克拉维酸(CD03，30μg/10μg)、头孢他啶/克拉维酸(CD02，30μg/10μg)，共19种。利福平(美国Sigma公司)、头孢噻肟(德国Hoechst公司)。

1.4 药物敏感试验

采用KB纸片扩散法，药敏结果均按照美国CLSI/NLS 2003年标准定义，以敏感(S)、中介(I)、耐药(R)报告结果。

1.5 ESBLs确证试验

参照CLSI/NLS M2?A8(2003年版本)推荐的纸片确证扩散法标准进行，采用头孢噻肟(30μg)，头孢噻肟/克拉维酸(30μg/10μg)，头孢他啶(30μg)，头孢他啶/克拉维酸(30μg/10μg)纸片检测，对两组中任何一个药物加克拉维酸的抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈直径相比，差值≥5mm时，可确证该菌株产ESBLs。

1.6 接合实验

利用分别含利福平、头孢噻肟抗生素的MH平皿筛选供体菌共91株，受体菌为利福平耐药的大肠埃希菌C600，接合完成后，用含有3mg/L头孢噻肟和150mg/L利福平的MH平皿筛选接合子。筛选出的接合子作生化鉴定与大肠埃希菌C600生化特征一致，对接合子进行KB法药敏试验和ESBLs表型确证。

1.7 结果分析

文中的数据和表格采用WHO5.3软件及Excell进行分析。耐药率比较采用SPSS11.0软件进行χ2检验。

2 结果

2.1 ESBLs分离率

2005年1月～12月临床分离的大肠埃希菌共197株，其中104株产ESBLs，ESBLs分离率为52.79%。

(1)产ESBLs菌株在不同标本中的分布 大肠埃希菌在中段尿标本中的分离株数最多(96株)，其次是痰(68株)和血液(11株)标本；产ESBLs株分别为47株(49%)、40株(58.8%)和3株(27.3%)。在BF刷片中分离率最高〔8株中产ESBLs 6株(分离率75%)〕，其次为脓液〔3株中产ESBLs 2株(66.7%)〕和伤口分泌物〔5株产ESBLs 3株(6%)〕。