黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究(一)

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作者：王庭欣　王庭祥　吴广臣　刘峥颢　夏立娅

【摘要】 目的研究黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响。方法采用ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验及迟发性变态反应试验测试黄芪多糖(Astragalus Polysaharide APS)对小鼠细胞免疫功能的影响；采用抗体生成细胞检测及半数溶血值实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响；采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响。结果黄芪多糖能明显提高小鼠的足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能，黄芪多糖对小鼠淋巴细胞增殖能力无明显影响。结论黄芪多糖对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞功能均有明显的增强作用。

【关键词】 黄芪；小鼠；多糖；免疫

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of astragalus polysaharide (APS) on immunological function in mice.MethodsBy lymphocyte transformation test and delayed type hypersensitivity (DTH), the effect of APS on celluar immunity was eva luated. By determining plaque forming cells (PFC) and HC50, the effect of APS on humoral immunity was studied. Abdomen macrophages of mice devour chicken red cell was used to asscess phagositosis of peritoneal macrophages.Resultspared with the normal control group, APS could promote DTH, PFC, HC50 and phagositosis of peritoneal macrophages,but had no effect on lymphocyte proliferation.ConclusionAPS can stimulate the immunological function in mice in different ways.

　　Key words：Astragalus; Mice; Polysaharide; Immunity

　　黄芪属豆科多年生草本植物，其主要含有多糖、谷甾醇、棕榈酸、胆碱、黄酮类等营养素，能镇静中枢神经系统，清除体内脂质过氧化物，具有较强的抗氧化作用〔1，2〕。本实验研究黄芪多糖对正常小鼠的免疫功能的影响，旨在探讨黄芪多糖对机体的免疫调节作用。

　　1 材料

　　1.1 试药

　　黄芪多糖本实验室自制，含量为60.2%，溶剂为蒸馏水。

　　1.2 动物

　　由河北医科大学实验动物学部提供，清洁级昆明种雌性小鼠（医动字第04056号）,18～22 g，144只，随机分为4组，每组36只，分别为溶剂对照组（只给蒸馏水）和黄芪多糖低、中、高（1.0，2.0，3.0 mg/kg.bw）3个剂量组，连续灌胃小鼠15 d。采用河北医科大学实验动物学部提供的全价饲料饲养。

　　1.3 试剂

　　MTT〔3-(4,5-Dimethyl-thiazo1-2yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide〕、PRMI-1640培养粉、刀豆蛋白A(ConA)为Sigma公司产品。

　　2 方法

　　2.1 迟发性变态反应(DTH)（足跖增厚法）

　　小鼠腹腔注射2%(V/V)羊红细胞SRBC 0.2 ml，致敏后4 d，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20 μl 20%SRBC，注射后于24 h测量左后足跖部厚度，同一部位测量3次，取平均值。以攻击前后足跖厚度的差值 (足距肿胀度)来表示DTH的程度。

　　2.2 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验

　　无菌取脾，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，然后将细胞悬浮于2 ml的完全培养液中，调整细胞浓度为2×106个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1 ml，一孔加50 μl ConA (相当于5 μg/ml)，另一孔作为对照，置5%CO2 37℃培养72 h。培养结束前4 h，每孔轻轻吸去上清液0.7 ml，加入0.7 ml不加小牛血清的RPMIl6A0细胞培养液，同时加入MTT(5 mg/ml)50 μl/孔，继续培养4 h。培养结束后，每孔加入1 ml盐酸异丙醇，吹打均匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个标本分装3孔作为平行样，在酶联免疫检测仪上比色测定，波长570 nm。

　　2.3 脾脏抗体生成细胞检测

　　每只鼠经腹腔注射2%SRBC 0.2 ml免疫5 d后，取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后，与等量双倍Hanks液混合，分装小试管，每管0.5 ml，再向管内加50 μl 10%SRBC、10 μl脾细胞悬液，混匀倾倒于琼脂糖玻片上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5 h，然后加补体，继续温育1.5 h，计数溶血空斑数。