苦参碱对小鼠免疫功能的影响(一)

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作者：尚智，丁涛，温富春，张伟，张殿文，纪凤兰，徐惠波

【摘要】 目的:观察苦参碱对小鼠脾淋巴细胞增殖和释放白细胞介素-2（IL-2）及腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1（IL-1）的影响。方法:溴化四唑蓝比色法测定脾淋巴细胞增殖，胸腺细胞增殖法和溴化四唑蓝比色法测定IL-1、IL-2活性。结果:苦参碱可明显抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及ConA诱导的小鼠脾细胞释放IL-2，对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1亦有一定的抑制作用。结论:苦参碱可抑制体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1。

【关键词】 苦参碱;免疫功能:淋巴细胞增殖;IL-1;IL-2

　　苦参碱Matrin是豆科槐属植物苦参Sophora fla-vescens Ait.，苦豆子S.AlopecuroidesL，广豆根S.Sub-prostrata Chun et T.Chen等中草药的活性成分。大量文献报道，苦参碱具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗纤维化、抗心律失常、镇痛、解热、平喘等作用〔1、2〕。为进一步研究苦参碱的免疫调节作用，本试验观察苦参碱对体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　Balb.c小鼠，6～7周龄，体重20～22g，吉林大学基础医学部实验动物中心提供。

1.2 药物及试剂

　　苦参碱由吉林省中医中药研究院提供;溴化四唑蓝（MTT）、细菌脂多糖（LPS）、刀豆蛋白A（ConA）为Sigma公司产品;二甲基亚砜（DMSO）广东汕头西陇化工厂产品;RPMI1640培养基，美国GIBCO公司产品;小牛血清（NBS）北京鼎国生物技术发展中心提供;其余试剂均为分析纯。

1.3 仪器

　　酶标仪，奥地利TECAN公司产品:CO2 培养箱，日本SANYO公司产品;倒置显微镜，日本OLYMPUS公司产品。

　　2 实验方法

　　2.1 苦参碱体外对正常小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响

　　2.1.1 正常小鼠脾淋巴细胞悬液的制备

　　无菌取正常小鼠脾脏，常规方法制备脾细胞悬液，用10%NBS-RBMI1640培养液调整细胞浓度5×106 .ml〔3〕。

　　2.1.2 T、B淋巴细胞增殖能力的测定 将5×106 .ml的脾细胞悬液加入96孔培养板中，100μl.孔，然后每孔加入终浓度为5μg.ml的ConA50μl，另一块培养板每孔加入使终浓度为10ug.ml的LPS50μl，然后每孔加入不同浓度的药液50μl，每个浓度设5个复孔，并设空白对照孔和阴性对照孔，将96孔培养板置于37℃5%CO
2 培养箱中培养48h后，每孔加入5mg.ml MTT10μl，继续培养4h，取出96孔板，1000r.min离心5min，弃上清，每孔加入DMSO150μl，置于微量振荡器上振荡10min，酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映淋巴细胞增殖能力的强弱〔4〕。

　　2.2 苦参碱体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响

　　2.2.1 IL-2的粗提 常规方法制备小鼠脾细胞悬液，调细胞浓度5×106 .ml，加入24孔培养板，每孔1ml，再加入终浓度为3μg.ml的ConA0.5ml及不同浓度药液1ml，置37℃5%CO2 培养箱中培养48h，2000r.min离心10min，取上清液，经0.22um微孔滤器过滤，得粗提IL-2的待测品，分装-20℃保存待测。