正交设计研究(一)

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作者：陈伟光 盛静 林霞 屠婕红 睢凤英 尹秀

　摘要：目的研究草叶中总黄酮的提取工艺条件。方法采用正交实验法，以总黄酮含量为考察指标，对草的总黄酮提取条件进行优选。结果所考察的因素中，草的提取工艺各因数影响程度为：乙醇浓度>溶剂用量>提取时间；最佳水平搭配为：A2B2C1。结论 草中黄酮类成分提取的最适宜工艺为：75%乙醇，料液比 1∶15，回流提取2次，1 h/次。

　　关键词：草； 总黄酮； 正交设计

　　Study on Extraction Technology for Flavonoids in Humulus scandens (Lour) Merr. by Orthogonal Design

　　Abstract：ObjectiveTo ascertain extraction technology condition for flavonoids from Humulus scandens (Lour.) Merr.MethodsThe optimizing extraction condition on the basis of flavonoids were determined by orthogonal design. ResultsThe order of factors which affected the flavonoid extraction was ethanol concentration > solvent quantity ＞ extraction hours；the best level match was: A2B2C1.ConclusionThe optimum extraction conditions are 75% ethanol extracting with material and solvent ratio 1∶15 for 1 hour in water bath for 2 times.

　　Key words：Humulus scandens (Lour.) Merr.； Total flavonoids； Orthogonal design

　　草为桑科植物Humulus scandens (Lour.) Merr.的全草。具清热解毒、利尿消肿等功效，用于肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、淋证、痔疮等证。据报道草全草含青兰苷、天门冬素、挥发油、鞣质及树脂；草叶含木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等黄酮类成分〔1〕。我们在研究草提取物的抗菌作用时发现，其水提取液对革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性，并证实抗菌作用与草中所含的黄酮类成分有关。本研究通过正交实验法考查了乙醇浓度、溶剂用量、提取时间三因素对草叶中总黄酮提取率的影响，以确定其最佳提取条件，为合理开发草资源提供科学依据。

　　1 仪器与材料

　　岛津UV2401PC紫外分光光度计，SWB 5200型超声清洗机（上海必能信超声有限公司），电子天平（北京赛多利斯），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080 9705），其他试剂均为分析纯。草采自嘉兴郊区，由本学院生药、天然药物化学教研室陈伟光老师鉴定。

　　2 方法与结果

　　2.1 标准曲线制备精密称取干燥至恒重的无水芦丁20 mg，置100 ml的容量瓶中，加60%的乙醇至刻度，摇匀，即得0.20 mg/ml对照品溶液。精密吸取该对照品溶液2，4，6，8，10 ml，分别置25 ml的容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min，加10.0%的硝酸铝溶液1.0 ml，摇匀，放置6 min，加4%的氢氧化钠溶液10.0 ml，用60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 min后于512 nm处测吸光度〔2〕。以浓度为纵坐标，吸光度值为横坐标进行线性回归，得回归方程为：A = 0.011 4 C + 0.025 7，r =0.999 7。线性范围： 0.4～2.0 mg/ml。