栀子中京尼平苷提取方法考察(一)
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作者：朱冬春 黄赵刚 夏泉 程钢 孙红玲 宋士卒 卫修来 葛朝亮 刘钢
【摘要】 目的建立栀子中京尼平苷的含量测定方法，在此基础上考察栀子中京尼平苷的提取方案。方法高效液相色谱法测定含量，采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-水（15∶85）；流速为1.0 ml/min；检测波长为238.4 nm。栀子粉末先醋酸乙酯回流提取，滤渣再用80%乙醇回流，考察提取效率及京尼平苷纯度。结果京尼平苷在12.5～200 μg/ml范围内呈良好线性关系，r=0.999 8。用乙醇回流的提取方式可使京尼平苷提取较完全，醋酸乙酯提取所得京尼平苷纯度较高。结论提取溶剂的种类对栀子中京尼平苷的提取效率及纯度有较大影响，先醋酸乙酯再乙醇的提取方法，可以得到部分纯度较高的京尼平苷，且不浪费药材，减少纯化等后续处理的难度。高效液相色谱法检测栀子中京尼平苷，方法快速、准确、可行。
【关键词】 京尼平苷；提取；测定；纯度；高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo develop an HPLC method for the determination of geniposide from gardenia. MethodsHigh performance liquid chromatography was used on ODS C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）with acetonitrile-water (15∶85) as a mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min.The detection wavelength was 238.4nm. First a circumfluence was made by ethyl ,the residue was extraced by 80% ethanol. Then the rate and purity of Geniposide extracted via different extraction solvent and extraction method. ResultsThe linear range of geniposide was 12.5～200 μg/ml,r=0.999 8. The extraction method of ethanol could get a higher extraction rate of Geniposide, and a high purity with ethyl acetate instead. ConclusionThe type of solvent in the extraction of Geniposide from Gardenia affects the efficiency of extraction significantly. Make a sequential extraction by using ethyl first and then the ethanol, we can not only get the Geniposide in a high purity, but also waste little herbs. Determination of Geniposide in Gardenia can be done fast and exactly by HPLC .
Key words：Geniposide; Extraction; Determination; Purity; HPLC
栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。据2005版《中国药典》Ⅰ部记载,其具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效，主治热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，目赤肿痛，火毒疮疡，扭挫伤痛，是一味临床常用的中药。近年研究表明，京尼平苷是主要有效成分之一〔1〕，其提取方法众多〔2〕。本文运用高效液相色谱法〔3～5〕建立京尼平苷含量测定方法，并在此基础上考察特定需要条件下京尼平苷的提取方式〔6〕，以便摸索出可行的提取工艺。
1 仪器与试药
1.1 仪器
RE-52型旋转蒸发仪，DL-5型大容量离心机，TGL-16H高速离心机，contrifuge电热恒温水浴锅，SB3200超声提取器，ZK-82B型真空干燥箱，XW-80A旋涡混合器；高效液相色谱仪系统：Agilent 1100型高效液相色谱仪（四元泵，自动进样系统，DAD检测器，Agilent化学工作站）。
1.2 试药
栀子（粉碎过4号筛），京尼平苷对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇(分析纯)、乙腈（分析纯,无锡亚盛化工有限公司），醋酸乙酯（分析纯），双蒸水。
2 方法与结果
2.1 HPLC分析方法的建立
2.1.1 京尼平苷溶液制备
样品溶液：取栀子药材粗粉末（过4号筛）约0.2 g，精密称定，置25 ml具塞容量瓶中，加入甲醇20 ml，定容后密塞称重，静置10 min后超声处理20 min，放冷称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，量取上清液待测。
标准品溶液:精密称取京尼平苷标准品适量，加甲醇配成100 μg/ml的溶液。
2.1.2 色谱条件
色谱柱为Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），流动相为乙腈-水（15∶85）；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；检测波长238.4 nm；柱温25℃，按外标法进行定量分析。
2.1.3 系统适用性
按照“2.1.2”项下色谱条件分析京尼平苷对照品溶液及栀子药材样品溶液，色谱图如图1～2所示。理论塔板数以京尼平苷计为12 000,拖尾因子在0.95～1.05范围内,分离度大于1.5，未见样品中其他组分干扰京尼平苷的测定。
2.1.4 标准曲线
取京尼平苷标准品溶液（400 μg/ml）,进行倍比稀释，分别配制成浓度为200，100，80，50，25，12.5 μg/ml的京尼平苷对照品溶液，在上述色谱条件下进样测定。以栀子苷进样浓度（X）对峰面积（Y）进行线性拟合。
所得标准曲线方程为Y= 14.143X+ 18.545，R2=0.999 8，结果表明，京尼平苷在12.5～200 μg/ml浓度范围内呈较好的线性。
2.1.5 精密度实验
取京尼平苷对照品溶液，在上述色谱条件下分别重复进样5次，进行测定，计算结果京尼平苷峰面积的RSD为1.32％。
2.1.6 重复性实验
取同一栀子药材，按照栀子药材样品溶液的制备方法，平行制备5份，按前述色谱条件进行分析，取样为0.2 g，求得京尼平苷峰面积的RSD为1.83％。
2.1.7 稳定性实验
取“2.1.1”项下的样品溶液，分别在0,1,2,12,24,48h按前述色谱条件进样分析，求得京尼平苷峰面积RSD为1.13%